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プロスタサイクリン合成酵素ヒト遺伝子の構造と発現調節機構の解明

阐明前列环素合酶人基因的结构和表达调控机制

基本信息

批准号：
07770099
负责人：
横山知永子
金额：
$ 0.51万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

血小板凝集抑制ならびに血管拡張作用という強力な生理活性をもつプロスタサイクリンの合成酵素遺伝子の構造を明らかにした。ヒト・プロスタサイクリン合成酵素(PGISと略す)の遺伝子は、10個のエクソンからなり約60kbであることが明らかとなった。本酵素遺伝子の3'非翻訳領域の塩基配列を決定したところ、複数のポリアデニレーションシグナルと3つのAlu反復配列が存在していた。3'非翻訳領域の異なる領域をプローブに用いたRNAブロットハイブリダイゼーションにより、ヒトPGISの6kbと3kbのmRNAは3'非翻訳領域の長さの違いによることが明らかになった。一方、ヒトPGIS遺伝子の5'非翻訳領域は非常にGC含量が高く、プライマー伸張法にて転写開始点を決定したところ、本酵素遺伝子の転写開始点は翻訳開始点の49bp上流であった。この領域にSp1,AP-2の認識配列が存在しており、さらに上流の塩基配列にγ-IFN,NF-κB,GATAなどの転写因子の認識配列が認められた。ヒトPGIS遺伝子のプロモーター領域を調べるために、5'上流のDNA断片をルシフェラーゼ遺伝子の上流に挿入し、得られたトランスフェクションベクターをヒトおよびウシの動脈内皮細胞にリポフェクチンを用いて導入し、一過性に発現するルシフェラーゼ活性を測定してプロモーター活性を調べたところ、翻訳開始点から150bpのGC含量が高くSp1,AP-2の認識配列を含む領域がプロモーター活性を有することが明らかとなった。

Platelet aggregation inhibition, vasoconstriction, potent physiological activity, and the structure of synthetic enzyme proteins are now known. The gene sequence of PGIS is about 60kb in length. The enzyme gene has a 3'non-inverted domain and a 3' non-inverted domain. The 6kb and 3kb mRNA of the 3'non-inverted domain are used to detect the presence of RNA in the 3' non-inverted domain and the presence of RNA in the 3'non-inverted domain. The 5'non-inverted domain of the PGIS gene is very high in GC content, and the start point of the enzyme gene is determined by the extension method. The start point of the enzyme gene is 49bp upstream. In this domain, the recognition of Sp1,AP-2 and γ-IFN,NF-κB,GATA gene sequences exist. PGIS DNA fragments from the upstream of the gene were introduced into the vascular endothelial cells and transiently detected. The activity of PGIS DNA fragments from the upstream of the gene was measured. The GC content of 150bp was higher than that of Sp1. AP-2 's cognitive allocation includes the following areas: