Biochemical characterization of autophagosome membranes and their role in lysosomal protein degradation
自噬体膜的生化特征及其在溶酶体蛋白降解中的作用
基本信息
- 批准号:04680200
- 负责人:
- 金额:$ 1.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
- 财政年份:1992
- 资助国家:日本
- 起止时间:1992 至 1993
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
In order to understand formation and maturation of autophagic vacuoles, I have characterized autophagic vacuolar membranes isolated from leupeptin-administered rat liver. In the first fiscal year of this research, I found that the isolated vacuolar membrance could be separated into two fractions (AL-L and AL-H) by C_aCl_2 treatment. AL-L closely resembles lysosomal membrane markers of lysosomas (1gp120), ER (cytochrome P450), and emdosomes (mannose 6-phosphate receptor) and is probably derived from vacuoles at earlier stages of the maturation. It is therefore interesting to see whether or not AL-H possesses some other markers specific for nascent autophagic vacuoles. In the second first year, I first tried to separate AL-H membrane proteins by two dimensional SDSPAGE.In immunoblotting analyzes, I found that antibodies raised against AL-H recognize two separate membrane proteins with molecular weights around 70k. The major one having more acidic pl values is a glycoprotein. The protein is unique to AL-H and hence might be a specific marker fo nascent autophagic vacuolar membrane. Amino acid sequence analysis on the 70k is now under progress. In immunoblotting analyzes using group specific antibodies to several types of cytochrome P450 isozymes, AL-H was found to prossess 2B, 2C and 2E isonzymes. However, sequence analysis revealed that the major vacuolar cytochrome P450 is different from cytochrome P45- 2C-11, the mofor P450 isozyme in ER.Thus, the data suggest possible enrollment of a specific P450 isozyme in autophagic vacuolar membranes. In conclusion, further investigation in to Al-H 2ill provide not only valuable information to characterize nascent autophagic vaculoles but also clues with which to study fusion mechanism between autophagic vacuoles and lysosomes.
为了了解自噬空泡的形成和成熟,我对从给药大鼠肝脏分离的自噬空泡膜进行了表征。在本研究的第一个财政年度,我发现用C_acl_2处理可以将分离的液泡膜分离成两个组分(AL-L和AL-H)。Al-L与溶酶体(1gp120)、内质网(细胞色素P450)和胞内体(甘露糖6-磷酸受体)的溶酶体膜标记物非常相似,可能来自成熟早期的液泡。因此,观察AL-H是否有一些新生的自噬空泡的其他标记是很有趣的。在第二个第一年,我首次尝试用二维SDSPAG分离AL-H膜蛋白,在免疫印迹分析中,我发现针对AL-H的抗体识别两个独立的膜蛋白,分子量在70k左右。具有更多酸性PL值的主要是一种糖蛋白。该蛋白是AL-H所特有的,因此可能是新生自噬空泡膜的特异性标志物。70k的氨基酸序列分析目前正在进行中。用几种细胞色素P450同工酶的群体特异性抗体进行免疫印迹分析,发现AL-H处理2B、2C和2E同工酶。然而,序列分析表明,主要的液泡细胞色素P450不同于细胞色素P45-2C-11,后者是内质网中的Mofor P450同工酶。因此,这些数据表明自噬空泡膜中可能存在特定的P450同工酶。综上所述,对TO Al-H2 ILL的进一步研究不仅为鉴定新生的自噬空泡提供了有价值的信息,而且为研究自噬空泡与溶酶体之间的融合机制提供了线索。
项目成果
期刊论文数量(20)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Daisaku Muno, Kazumi Kshidoh, Takashi Ueno, Eiki Kominami: "Processing and transport of the precursor of cathepsin C during its transfer into lysosomes" Archives of Biochemistry and Biophysics. Vol. 306. 103-110 (1993)
Daisaku Muno、Kazumi Ksidoh、Takashi Ueno、Eiki Kominami:“组织蛋白酶 C 前体在转移到溶酶体期间的加工和运输”生物化学和生物物理学档案。
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- 发表时间:
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上野隆: "タンパク質の寿命と代謝" 現代化学. 22(増刊). 115-122 (1993)
Takashi Ueno:“蛋白质寿命和新陈代谢”Gendai Kagaku 22(特别版)。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
上野 隆: "タンパク質の寿命と代謝" 現代化学(増刊). 22. 115-122 (1993)
Takashi Ueno:“蛋白质寿命和代谢”现代化学(特别版)22。115-122(1993)。
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- 通讯作者:
上野 隆,木南 英紀: "蛋白質の寿命と代謝" 現代化学. (1993)
Takashi Ueno,Hideki Kinami:“蛋白质的寿命和代谢”Gendai Kagaku (1993)。
- DOI:
- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Daisaku Muno: "Processing and transport of the precursor of cathepsin C during its transfer into lysosomes." Archives of Biochemistry and Biophysics. 306. 103-110 (1993)
Daisaku Muno:“组织蛋白酶 C 前体在转移到溶酶体过程中的加工和运输。”
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