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細胞骨格アクチンの光化学的切断による機能改変

通过光化学裂解对细胞骨架肌动蛋白进行功能修饰

基本信息

批准号：
05808060
负责人：
岡本洋
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Muroran Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05808060/
关键词：
アクチン光化学的切断バナジン酸重合能切断部位の同定

项目摘要

我々はミオシンATPase光化学的切断で得た知識をアクチンへ適用してみたいと考えた。立体構造が解明されてアクチンのドメイン内部に重要なヌクレオチド結合部位が明かとなったからである。アクチンはなぜ重合していないとミオシンATPase活性を活性化できないのか、という疑問はアクチン分子間の結合について良く知らなければ答えられない。さらにミオシンがアクチン上を滑るためにはアクチン分子のどのような表面と相互作用する必要があるのか、については両タンパク質の接触の生理的条件での有り様を知る必要がある。これらの問題に答えるひとつの道はアクチンまたはミオシンの機能部位を特異的に改変し機能の変化を調べることである。10mMという比較的高濃度のバナジン酸の存在下でGアクチンが光化学切断された。分子量42kDaのアクチンから22kDaと20kDaのふたつのフラグメントが生じ、蛍光標識の結果から前者がアクチンのアミノ末端由来であることが判明した。この光切断アクチンの重合性は極めて低くかった。切断部位のアミノ酸残基を明らかにするために20kDa成分のアミノ酸配列分析を行ったがEdman分解できなかった。これは光化学切断部位に遊離のアミノ基が出ていないことを示すものと考えられる。そこでこの切断点を一端とする小ペプチドをプロテアーゼ処理によって得た後それらのアミノ酸配列および組成分析から切断部位を決定を行い、Fアクチンにおけるモノマー間の接触領域に切断点があると思われる結果を得た。これらの実験で分析試料の凍結保存に本補助金で購入したディープフリーザーが大変役だった。

I want to know how to cut off the ATPase photochemical process. The three-dimensional structure is very important in the interior of the structure. The activity of ATPase is activated. The binding between molecules is well known. It is necessary to understand the physiological conditions of contact between molecules and surfaces. The answer to this question is to change the function of the functional site. 10mM to 10 mM in the presence of higher concentrations of chlorogenic acid. Molecular weight: 42kDa, 22kDa, 20kDa, 22 kDa The light cuts off the coincidence of the light. The cleavage site was identified by Edman decomposition of the 20kDa component. The photochemically cleaved site is free and free from impurities. For example, if you want to cut off the contact area, you can cut off the contact area. This grant was purchased for frozen storage of analytical samples.