ラットおよびヒト表皮型ペプチジルアルギニンデイミナーゼの構造と生理機能の解明

大鼠和人表皮肽基精氨酸脱亚胺酶的结构和生理功能的阐明

• 批准号: 06660089
• 负责人: 高原 英成
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Ibaraki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06660089/
• 关键词: ペプチジルアルギニンデイミナーゼ; ラット表皮; ヒト正常培養表皮細胞; cDNA クローニング; RT-PCR法; 5'RACE法; 3'RACE法

タンパク質中のアルギニン残基をCa2^+依存的に脱イミノ化しシトルリン残基に変換するPeptridylarginine deiminase(PAD)には3つのアイソフォームtypeI.II.IIIが存在する。表皮にのみ存在するtypeIIIについては、材料の調製が困難なこともあり殆ど研究が行われていない。本研究では、typeIIIの酵素化学的性質、生理機能、ならびに発現制御機構を解明するうえで極めて重要なステップである。cDNAのクローニングを試みた。精製ラット表皮由来PAD typeIIIの内部アミノ酸配列情報に基づきRT-PCR法、ついで5'RACE法ならびに3'RACE法を組み合わせ解析をすすめた結果、全長3096bpのほぼ完全長と思われるラットPAD typeIIIcDNAのクローニングに成功した。本cDNAは、42bpの5'非翻訳領域と664アミノ酸残基をコードする1995bpの翻訳領域と1059bpの3'非翻訳領域からなり、3'非翻訳領域内の3081番目にはAATAAAのポリA付加シグナルが存在し、その11番目後の3096からポリAが付加すると判断できた。ラットPAD typeIIIは664アミノ酸残基からなる分子量75,036Da、計算上の等電点5.13の弱酸性タンパク質であった。ラットPAD typeIIに対する相同性は、アミノ酸レベルで50.8%、DNAレベルで62.1%であり、特にC末端側の配列での高い相同性が特徴的であった。また、活性発現への関与が示唆される2つのヒスチジン残基および1つのシステイン残基は、typeIIIにおいても保存されていた。ついで、ヒト正常培養表皮細胞を用いヒトPAD typeIIIについてもそのcDNAのクローニングを試みた。本研究で明らかにしたラットPAD typeIIIの特徴的なアミノ酸配列の塩基配列情報によりヒトPAD typeIIIcDNAをRT-PCR法によりクローニングした。その結果、ヒトPAD typeIIIcDNAについても全長の約60%の領域のクローニングを行うことができた。さらに、現在残りの領域についても解析を進めている。このように、本研究ではこれまで困難とされてきた、表皮型PADのcDNAを世界で初めてクローニングをすることに成功することができたことから、同酵素に関する研究は今後大いに進展できるものと確信している。

Peptridylarginine deiminase (PAD) type I.II.III exists. The epidermis is of type III and the material is difficult to modulate. It is difficult to study and research. This study focuses on the chemical properties, physiological functions, and control mechanisms of type III enzymes and their control mechanisms. cDNAのクローニングをtestみた. Refined ラットepidermal origin PAD typeIII's internal アミノacid alignment information にbased づきRT-PCR method, ついで5'RACE method ならびに3' RACE method み合わせanalytic をすすめた results, full length 3096bp のほぼfull length と思われるラットPAD typeIIIcDNAのクローニングに successfully. This cDNA contains 42bp of the 5' non-translation domain and a 664 アミノ acid residue をコードする1995bp of the 5' non-translation domain and 1059bp of the 3' non-translation domain of the からなり, 3' In the non-translation field, the 3081st chapter of the 3081st chapter of the AATAAA のポリA pay plus シグナルが exists, and the 3096 of the 11th chapter of the その11th chapter のからポリA が Pay the plus すると judgment is できた. RadoPAD type III is a weakly acidic 664-amino acid residue with a molecular weight of 75,036 Da and a calculated isoelectric point of 5.13.ラットPAD typeII homogeneity, Amin acid acid 50.8%, DNA レベルで62.1% であり, であった which has a special C-terminal side arrangement and high homogeneity.また, active 発appears への关 and が时憆される2つのヒスチジン residue および1つのシステインは、typeIIIにおいてもsave されていた. The epidermal cells of ついで and ヒト were normally cultured and tested using いヒトPAD typeIII についてもそのcDNAのクローニングを. This study is based on the specific information on the acid alignment and base alignment of the specific PAD type III. typeIIIcDNAをRT-PCR method is used.そのRESULTS, ヒトPAD typeIIIcDNAについてもThe total length is about 60% of the field of のクローニングを行うことができた.さらに、Now the remaining りの区についてもanalyticsを入めている.このように、This research is difficult とされてきた、Epidermal type PAD のcDNAをWorld でInitial めてクローニングをThe research on the success of the research on the same enzyme and the success of the research on the same enzyme will be a big success in the future and the progress of the research will be confirmed.