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脳由来の新しいセルピン様蛋白質の構造と機能に関する研究

一种新型脑源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构与功能研究

基本信息

批准号：
06670114
负责人：
西堀正洋
金额：
--
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670114/
关键词：
セルピンプロテアーゼアストログリアニューロン

项目摘要

牛脳ホモジネートの上清画分から、熱処理、イオン交換クロマト、ゲル濾過等の操作によって新しいSerpin(B-43)を精製した。精製蛋白は分子量43kD、等電点5.3-5.4で、部分アミノ酸配列は他のSerpin family 蛋白と高い相同性を有していた。B-43はヘパリンアフィニティカラムには結合せず、同じく脳から精製されているProtease nexin-1とはヘパリン親和性において異なっていることがわかった。また標的プロテアーゼの検索のために行ったプロテアーゼとの結合実験では、ウシトロンビン、ブタエラスターゼ、ヒトプラスミン、ヒトウロキナーゼといずれもSDS安定性の複合体を形成しなかった。従って現在のところ、標的プロテアーゼの性質については不明である。得られた内部アミノ酸配列からヌクレオチドプライマーを合成し、PCR反応によりcDNAフラグメントを得た。得られたシークエンスは,Serpinに共通するアミノ酸配列を含んでおり、目的とするフラグメントであると考えられた。これをプローブとして、牛脳cDNAライブラリーをscreeningし、ほぼ全長をコードするクローンが得られたので現在、シークエンスを行っているところである。一方、B-43に対するウサギポリクローナル抗体によって細胞局在について検討したところ、ウシ大脳皮質、海馬、線条体小脳のGFAP陽性アストログリア細胞が陽性細胞として同定された。その陽性突起はしばしば血管壁まで追跡することができた。また大脳皮質第VI層錐体細胞、線条体ニューロン、海馬CAI、CA2領域に多数陽性神経細胞が存在した。これらの結果はB-43が、アストログリア、神経細胞の両方の機能に関与することを示唆する重要な知見である。

The new Serpin(B-43) is refined in the operation of supernatant separation, heat treatment, color exchange, and color filtration. The purified protein has a molecular weight of 43kD, isoelectric point of 5.3-5.4, partial acid alignment, and high homology with other Serpin family proteins. B-43 is a complex complex The actual combination of the standard Protex search and the Protex search is the formation of a complex of SDS security, including the security of the device, and the security of the device.従って现在のところ、标的プロテアーゼの性质については不明である。The sequence of DNA sequences was obtained by PCR. The purpose of this study is to investigate the relationship between the two groups. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. The GFAP positive cells in the cortex, hippocampus, and striatum of the brain are also identified by B-43. The positive process is traced to the blood vessel wall. Most positive neurons existed in pyramidal cells, linear neurons, hippocampal CAI and CA2 in layer VI of cortex. The results are important insights into B-43, cell proliferation, and the function of neurons.