CD63関連遺伝子クローニングとその蛋白機能解析
CD63相关基因克隆及蛋白功能分析
基本信息
- 批准号:05670095
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
- 财政年份:1993
- 资助国家:日本
- 起止时间:1993 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
我々は止血異常を主徴とする体性劣性遺伝疾患Hermansky-Pudlack症候群で著明に低下している血小板濃染顆粒膜蛋白質Granulophysinを精製し、この蛋白質がCD63と同一蛋白であると結論した。本年度の研究では、CD63と構造的に類似する新しいgene family(トランスメンブレン4)のcDNAクローニングを試みた。ヒト白血球、ヒト脳、ヒトneuroblastomaよりmRNAを精製し、逆転写酵素によりcDNAを合成し、PCRの鑄型とした。CD63及び関連蛋白の膜貫通領域I、IIをコードする以下の混合primerを合成した。各鑄型を用いてPCR反応を行ったところ185-240bpに数本のバンドが認められた。ヒト脳から得られた195bpのfragmentをpCRIIに組み込み、サブクローニングし、塩基配列を決定したが得られたクローンはこれまでのところCD63の配列とすべて一致した。現在、他の大きさのfragmentのシークエンスを試みている。一方、人胎児線維芽細胞培養上清に抗granulophysinモノクローナル抗体を8〜40μg/ml添加し、細胞形態・細胞増殖に対する効果をみたが、現在までのところ有意の変化は認められていない。
The main characteristics of hemostatic abnormalities in patients with Hermansky-Pudlack syndrome are: low platelet concentration, granular membrane protein, and purification of CD63 protein. This year's research is similar to the CD63 gene family and the cDNA library. White blood cells, leukocytes, neuroblastoma, mRNA purification, reverse transcription enzymes, cDNA synthesis, PCR and DNA sequencing CD63 and related proteins were synthesized in the following mixed primers Each mold was used for PCR amplification, which was carried out at 185-240bp. The 195bp fragment was found in the CRII and the CD63 was found in the CRII. Now, he's got a big fragment. Try it. In addition, 8 ~ 40μg/ml of anti-granulophysin antibody was added to supernatant of cultured human fetal cell line, cell morphology and cell proliferation.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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