プロテイン・ジスルフィド・イソメラーゼ類似の小胞体蛋白質ERp61の機能の解析

与蛋白质二硫键异构酶相似的内质网蛋白ERp61的功能分析

• 批准号: 06670221
• 负责人: 佐賀 信介
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670221/
• 关键词: ERp61; Protein disulphide isomerase; redox活性; S-S結合; IgG; 組織分布

1.ERp61がProtein disulphide isomerase(PDI)と同様なredox活性を持つか調べた。glutathione存在下でinsulinのS-S結合を解離させ遊離peptidesの凝集に伴う濁度変化で解析した結果、ERp61はPDIの約5分の1ではあるが明らかなredox活性を有することが判明した。2.S-S結合を含む蛋白質の合成の盛んな細胞と少ない細胞のERp61の発現について、蛍光抗体法、Western blotting、Northern blottingで調べた。IgG産生hybridomaより非産生株、κ鎖産生株、IgG産生株をcloningしてIgG産生とERp61の発現の相関を調べた結果、完全なIgGを産生している株におけるERp61の発現は非産生株やκ鎖のみを産生する株より数倍高いことが明らかとなった。また、F9 mouse teratocarcinoma cellsを分化させ、 ERp61の発現の変化について調べた。F9 cellsの分化に伴い、S-S結合を多く含むIV型collagenやlamininの産生が誘導されるのと同時にERp61の発現も顕著に誘導された。3.ratの各組織について蛍光抗体二重染色法でERp61とPDIの組織分布の相違について解析した。ERp61とPDIはともに種々の細胞に存在したが、甲状腺濾胞上皮、気管支腺細胞、胃主細胞、などにはどちらも多量に検出された。一方、リンパ節、脾臓、消化管固有層の形質細胞にはERp61が多く存在したが、PDIは乏しかった。膵ランゲルハンス島、消化管の粘液産生細胞、下垂体の一部の細胞でも同様な結果が得られた。精細管においていはERp61が内方のより分化した細胞に多くみられたがPDIは基底膜近くの細胞に多く認められた。以上の結果からERp61はPDIと同様なredox活性を有し、IgGなどの蛋白質のS-S結合の形成に関わっていることが示唆された。また、PDIとは一部異なる組織分布を示すことから、それぞれの酵素の基質となる蛋白質に特異性があることが推測された。

1. ERp61 Protein disulfide isomerase(PDI) and isoreductase activity are regulated. In the presence of glutathione, the S-S binding of insulin was dissociated, the aggregation of free peptides was accompanied by turbidity change. The analysis results showed that the PDI of ERp61 was about 5 minutes and 1 minute. 2.S-S binding protein synthesis and expression of ERp61 in cells, fluorescent antibody method, Western blotting and Northern blotting IgG-producing hybrids, kappa lock-producing strains, IgG-producing strains, cloning, IgG production, and ERp61 expression were correlated with the results of modulation, complete IgG production, and ERp61 expression, and non-producing strains, kappa lock-producing strains, and IgG-producing strains. F9 mouse teratocarcinoma cells differentiation, ERp61 expression and transformation F9 cell differentiation, S-S binding, and induction of type IV collagen and laminin production 3. The analysis of ERp61 and PDI in different tissues by double staining method ERP61 is the most common type of cell in the thyroid gland. It is the most common type of cell in the stomach. ERp61 is present in many cells in the lamina propria of the digestive tract, and PDI is absent. The same results were obtained for the mucus producing cells of the digestive tract and the pituitary gland. ERP61 is a very sensitive and sensitive cell. The above results indicate that ERp61 has the same redox activity as PDI, and that it is related to the formation of S-S binding of IgG. The protein specificity of the enzyme matrix was estimated.

项目成果

Yasuo Yamashita: "Rapid degradation of the heavy chain of class I major histocompatibility complex antigens in the endoplasmic reticulum of human cytomegalovirus-infected cells." J.Virol.68. 7993-7943 (1994)

Yasuo Yamashita：“人巨细胞病毒感染细胞内质网中 I 类主要组织相容性复合体抗原的重链快速降解。”

Sumiko Hyuga: "Autocrine factor enhancing the secretion of Mr 95,000 gelatinase (matrix metalloproteinase 9) in serum-free medium conditioned with murine metastatic colon carcinoma cells." Cancer Res.54. 3611-3616 (1994)

Sumiko Hyuga：“自分泌因子可增强小鼠转移性结肠癌细胞条件下的无血清培养基中 Mr 95,000 明胶酶（基质金属蛋白酶 9）的分泌。”

Ken-ichi Kozaki: "Tissue distribution of ERp61 and association of its increased expression with IgG production in hybridoma cells." Exp.Cell Res.213. 348-358 (1994)

Ken-ichi Kozaki：“ERp61 的组织分布及其表达增加与杂交瘤细胞中 IgG 产生的关联。”