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蛋白質ジスルフィド結合形成に関与する小胞体酵素群の機能と発現に関する研究

蛋白质二硫键形成内质网酶的功能及表达研究

基本信息

批准号：
08670271
负责人：
佐賀信介
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

小胞体(ER)内で蛋白質のS-S結合形成に働くprotein disulfide isomeraseのファミリー蛋白質(PDI,ERp61,ERp72)が蛋白質のfoldingにどのように関わっているかを調べ、発生の過程でこれらの酵素の発現がどのように推移するかを解析した。マウスのIgG産生細胞、IgM産生細胞、IgA産生細胞におけるPDI,ERp61,ERp72の発現を、蛍光抗体法、Western blotting、免疫沈降法により比較検討した結果、IgM産生細胞およびIgA産生細胞ではIgG産生細胞に比べてERp61およびERp72の発現が高いことが明らかとなった。また、免疫グロブリン産生細胞では、線維芽細胞などの他の細胞型に比してPDIの産生が低いことも明らかになった。さらに、chemical cross-linking処理を施してPDI,ERp61,ERp72と免疫グロブリンが免疫沈降により共沈するか調べた結果、IgA産生細胞ではERp72とERp61がIgAに結合していることが明らかになった。IgM産生細胞でも、従来の報告で指摘されていたIgMとPDIの結合より、むしろIgMとERp72、ERp61の結合が主要であることが判明した。このことはIgMやIgAのS-S結合形成にはPDIよりむしろERp72やERp61が重要であることを示唆している。insulinのfoldingに果たすPDI,ERp61,ERp72の役割についても検討した。insulinを還元して得られる変性型aggregatesにそれぞれの酵素を作用させたところ、どの酵素でも再溶解させることは出来なかったが、PDIとERP72がinsulin aggregatesに結合することが明らかとなった。この性質がこれらの蛋白質のシャペロン活性と密接に関連していると考えて、更に解析を進めている。ERP61にはこの性質は認められなっかた。胎生11日から16日のマウス胎仔の発生に伴うこれらの発現の変化について免疫組織化学的に解析した。いずれの酵素も胎生11日目には既に広範な細胞型において発現を認めた。発生が進むにつれて、椎体の軟骨原器や、肝細胞などにおける発現が増強した。PDI,ERp61,ERp72それぞれの発現が、特異な細胞型の発生に随伴して来ることも確かめられた。例えば、発生15日以降の腸管杯細胞へ分化した細胞にはERp61が強く発現し、同時期の腎糸球体上皮にはERp72が強く発現していた。

Protein disintegration isomase is involved in the formation of S-S binding in small cells (ER). Proteins (PDI, ERp61, ERp72) are involved in the regulation and development of protein folding, and the development of enzymes is involved in the analysis of protein folding. The results of comparative study showed that IgG-producing cells, IgM-producing cells, IgA-producing cells, ERp61, ERp72 were higher than ERp61, ERp72 in the development of PDI, ERp61, ERp72, IgG-producing cells, IgA-producing cells and IgG-producing cells. The production of PDI by cells that produce PDI is lower than that by cells that produce PDI. In addition, chemical cross-linking treatment was applied to PDI,ERp61,ERp 72 and IgA producing cells. IgM production cells were found to bind to PDI, IgM to ERp72 and ERp61. The combination of IgM and S-S is important for the formation of ERp72 and ERp61 INSULIN AND FOLDING RESULT PDI,ERp61,ERp72 AND INSULIN AND FOLDING RESULT Inulin aggregates are produced by enzyme digestion. The properties of these proteins are related to their activity and affinity. ERP61 is the first to be identified. Immunohistochemical analysis of fetal development from day 11 to day 16 The enzyme is born on the 11th day, and the cell type is recognized. The development of cartilage, cartilage and liver cells is increasing. PDI,ERp61,ERp72 and ERP 61 are the most common types of cell types. ERp61 was strongly expressed in the differentiated cells of intestinal cup cells after 15 days of birth, and ERp72 was strongly expressed in the epithelium of renal sphere at the same time.