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C型肝炎ウイスルの肝発癌機構とくにウイルス非構造蛋白による遺伝子活性化の解析

丙型肝炎病毒致癌机制分析，特别是病毒非结构蛋白激活基因

基本信息

批准号：
06670589
负责人：
蓮村靖
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kanazawa Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670589/
关键词：
C型肝炎ウイルスウイルス非構造蛋白

项目摘要

C型肝炎ウイルス(HCV)の非構造蛋白領域(NS)とくにNS3の機能を解明する目的で、1.NS3領域を有する大腸菌発現ベクターを作成して、N′末端領域発現用ベクターから32kDa蛋白、またC′末端領域発現用ベクターからは49kDa蛋白の2種の発現蛋白の採取に成功した。2.これら2種の発現蛋白が、ともにHCV感染患者血清とのみ反応し、ウイルス非感染者の血清とはまったく反応しにないこと、さらに発現蛋白にはATPase活性が証明されることを示した。3.正常マウス細胞にNS3発現用ベクターを導入し、NS3の細胞機能への影響を検討した。すなわち、細胞導入用の発現ベクターはNS3のN′末端側あるいはC′末端側領域をCMVのIEプロモーター下流に組み込んで作製し、これら2種の発現ベクターをマウス細胞(NIH3T3)にリポフェクチン法を用いて導入した。その結果、NS3領域のとくにN′末端側を導入した細胞では、細胞増殖が著明に亢進していることのほか、フォーカス形成能とコロニー形成能も著しく高まっていることが判明した。4.この導入細胞について、細胞内の発現蛋白の性状をHCV患者血清を用いたウエスタンブロット法で、またHCVDNAの存在をPCR法およびサウザンブロット法で検索した。その結果、本細胞には明らかなHCVの導入が確認できることが判明した。5.このN′末端側を導入して細胞増殖能が亢進した細胞をヌードマウスに接種して、接種動物の変化を観察した。その結果、細胞接種3週後の動物に明瞭な腫瘤形成が認められることが判明した。以上、HCVのとくにNS3領域の機能の一部は細胞の形質転換能であり、この機能の発現がウイルス感染細胞の転帰に大きな影響を及ぼす可能性を示す新しい成果を得た。

The non-structural protein domain (NS) of hepatitis C virus (HCV) and the function of NS3 are explained and the purpose is explained. 1. The NS3 domain is made of coliform bacteria.て, the N′ terminal domain is now using a 32kDa protein, and the C′ terminal domain is currently using a 49kDa protein. 2. これら 2 kinds of の発protein が, ともにHCV infected patient serum とのみanti-し, ウイルス serum from non-infected patientsとはまったく濜しにないこと, さらに発appears protein にはATPase activity がproves されることをshows した. 3. NS3 can be introduced into normal Masato cells by using sterilizer, and the function of NS3 cells can not be affected.すなわち, cell introduction の発appears ベクターはNS3 のN′ terminal side あるいはC′ terminal side domain をCMV のIE プロモーターDownstream The two kinds of の発成ベクターをマウス cells (NIH3T3) made by に组み込んでし, and これら2 kinds of の発成ベクターをマウス cells (NIH3T3) were introduced by いて using the にリポフェクチン method.そのRESULTS, NS3 domain のとくにN′ terminal side を introduction したcell では, cell proliferation が明に Hyperactivity していることのほか, フォーカス Forming Energy and とコロニー Forming Energy しく高まっていることが clarificationした. 4. Introduce the properties of proteins into cells and use them in the serum of HCV patients.ブロットmethodで、またHCVDNAのexistingをPCR法およびサウザンブロット法で検SOした.そのResults, the cells are clear, the introduction of HCV into the cells is confirmed, and the results are confirmed. 5. When the N′ terminal side is introduced, the proliferative ability of the cells is increased, the cells are inoculated, and the inoculated animals are transformed and inspected. As a result, the animals were able to detect tumor formation 3 weeks after cell inoculation. Above, the function of HCV in the NS3 field is a part of the cell's shape and mass transduction, and its function is The possibility of infection of cells and the possibility of infection of cells are revealed and the results are obtained.