C型肝炎ウイルス非構造蛋白領域における機能と発癌機序の解析

丙型肝炎病毒非结构蛋白区域的功能及致癌机制分析

• 批准号: 13770286
• 负责人: 加藤 純子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770286/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; HCV非構造蛋白領域; Cre; lox-Pスイッチング発現システム; トランスジェニックマウス; 肝細胞癌; C型肝炎ウイルス非構造蛋白質領域

C型肝炎ウイルス(HCV)がどのようなプロセスを経て、宿主を癌化へと導くのかは、全く解明されていない。HCV蛋白質、特に肝細胞癌に関与しているといわれるNS3蛋白質の働きをみるために、DNA組み換え酵素であるCreにより、遺伝子の発現が開始されるCre/lox-Pスイッチング発現システムを用いて、HCV遺伝子の非構造蛋白質部分を組みこんだトランスジェニックマウス(Tgマウス)を作製し、解析を試みた。Creを発現する組み換えアデノウイルスを接種するか、または、Creを発現するマウスと交配させることによりHCV遺伝子を発現させた。慢性肝炎患者の血清から抽出したHCVを、NS2領域からNS5a領域までをクローニングし、Cre/lox-Pスイッチング発現ユニットに組みこみ、Tgマウスを作成した。トランスジーンの組み込みがあるものは、PCR法により11ライン確認された。サザンプロット解析の結果により正しい大きさと組換えのおこるトランスジーンを持つTgマウスは、9ラインであった。そのうち5ラインは、RT-PCR法によりmRNAが確認された。さらにノーザンプロット法にて、正しい大きさをもつマウスは、2ライン認められた。mRNAのsequenceをおこない、2ラインとも正しいことが明らかになった。また、蛋白質の産生をみるため、AxCANCreを2回投与後、さらにブースターとしてC14抗原を投与し、経時的に血清中のC14抗体価を測定した。C14抗原投与2週間後にTgマウスは、C14抗体価は2.5以上と陽性を示した。以上よりこのTgマウスは、HCV蛋白質を発現させることと判断した。このTgマウスにCreを発現する組み換えアデノウイルスを接種を繰り返すこととで,HCV蛋白質の直接的細胞障害機序による肝細胞発癌のメカニズムと、CTLを介しておこる炎症と肝細胞の再生の繰り返しで、発癌が生じるか否かの検討をしている。まだ、HCV遺伝子非構造蛋白質だけでは、肝細胞発癌は認められていないが、引き続き、発癌に関係する他の因子とを複合して肝細胞発癌のメカニズムを検討中である。

Hepatitis C virus (HCV) is a virus that can cause cancer in the host and the host. HCV protein, especially related to hepatocellular carcinoma, is involved in the development and analysis of NS3 protein, Cre/lox-P protein development and gene development. The non-structural protein part of HCV protein is organized and analyzed. Cre is the first to appear in the genome. Chronic hepatitis patients serum extract from HCV, NS2 domain, NS5a domain, Cre/lox-P domain. The PCR method was used to confirm the identity of the virus. The results of the analysis are as follows: mRNA was identified by RT-PCR. In addition to the above, it is also possible to use the following methods: The mRNA sequence is the same as the mRNA sequence. C14 antibody in serum was determined after 2 rounds of protein production and administration. C14 antigen and 2 weeks after the Tg, C14 antibody more than 2.5 The above Tg is determined by HCV protein development. HCV protein is a direct cellular barrier mechanism for hepatocellular carcinogenesis, CTL mediates inflammation, hepatocellular regeneration, and carcinogenesis. HCV gene non-structural protein component analysis, liver cancer development response, induction, cancer development related factors and complex analysis of liver cancer development

项目成果

川上 明美: "MC-FANの基準値の設定と種々の因子の影響についての検討"Hemororheology and relaterd research. 3. 9-14 (2000)

Akemi Kawakami：“设定MC-FAN的参考值并考虑各种因素的影响”血液流变学及相关研究（2000）。

Establishment of transgenic mice carrying the HCT genome of non structure protein regions

携带非结构蛋白区域HCT基因组转基因小鼠的建立

• 期刊: Hepatology (in press)
• 作者: J.Kato;T.Wakita;et al.
• 通讯作者: et al.

T.Wakita: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system"J.Med.Virol.. 63(2). 308-317 (2000)

T.Wakita：“细胞毒性 T 细胞对 Cre/loxP 系统介导的丙型肝炎病毒 cDNA 转基因小鼠急性肝损伤的可能作用”J.Med.Virol.. 63(2)。

T.Kato: "Regulated production of P21 core protein in hepatitis C virus cDNA by its C-terminal sequence"J.Biol.Chem.. (in press).

T.Kato：“通过 C 端序列调节丙型肝炎病毒 cDNA 中 P21 核心蛋白的产生”J.Biol.Chem..（出版中）。

加藤 純子: "ウイルス性肝炎感染対策"Clinical Engineering. 12(5). 380-387 (2001)

加藤淳子：“病毒性肝炎感染的对策”临床工程12（5）380-387（2001）。