C型肝炎ウイルス非構造蛋白領域における機能と発癌機序の解析

丙型肝炎病毒非结构蛋白区域的功能及致癌机制分析

• 批准号: 11770290
• 负责人: 加藤 純子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770290/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; トランスジェニックマウス; 肝細胞癌; C型肝炎非構造蛋白; 非構造蛋白領域; Cre; lox-P

C型肝炎ウイルス(HCV)がどのようなプロセスを経て、宿主を癌化へと導くのかは、全く解明されていない。HCV蛋白質、特に肝細胞癌に関与しているといわれるNS3蛋白質の働きをみるために、DNA組み換え酵素であるCreにより、遺伝子の発現が開始されるCre/lox-Pスイッチング発現システムを用いて、HCV遺伝子の非構造蛋白質部分を組みこんだトランスジェニックマウス(Tgマウス)を作製し、解析を試みた。Creを発現する組み換えアデノウイルスを接種するか、または、Creを発現するマウスと交配させることによりHCV遺伝子を発現させた。慢性肝炎患者の血清から抽出したHCVを、NS2領域からNS5a領域までをクローニングし、Cre/lox-Pスイッチング発現ユニットに組みこみ、Tgマウスを作成した。トランスジーンの組み込みがあるものは、PCR法により11ライン確認された。サザンブロット解析の結果により正しい大きさと組換えのおこるトランスジーンを持つTgマウスは、9ラインであった。そのうち5ラインは、RT-PCR法によりmRNAが確認された。さらにノーザンブロット法にて、正しい大きさをもつマウスは、2ライン認められた。mRNAのsequenceをおこない、2ラインとも正しいことが明らかになった。また、蛋白質の産生をみるため、AxCANCreを2回投与後、さらにブースターとしてC14抗原を投与し、経時的に血清中のC14抗体価を測定した。C14抗原投与2週間後にTgマウスは、C14抗体価は2.5以上と陽性を示した。以上よりこのTgマウスは、HCV蛋白質を発現させることと判断した。このTgマウスにCreを発現する組み換えアデノウイルスを接種を繰り返すこととで、HCV蛋白質の直接的細胞障害機序による肝細胞発癌のメカニズムと、CTLを介しておこる炎症と肝細胞の再生の繰り返しで、発癌が生じるか否かの検討をしている。まだ、HCV遺伝子非構造蛋白質だけでは、肝細胞発癌は認められていないが、引き続き、発癌に関係する他の因子とを複合して肝細胞発癌のメカニズムを検討中である。

Hepatitis C virus infection (HCV), hepatitis C virus infection, host hepatitis C virus infection, host hepatitis C hepatitis virus infection, hepatitis C virus infection. HCV protein, special liver cancer cell cycle, special liver cancer protein, NS3 protein, Cre protein, Cre/lox-P protein, Tg protein, protein and protein. Parse the attempt attempt. Cre has shown that it is possible to transfer genes to mice, mice, and Cre cells, and to detect the ability of mice to mate, mice, HCV mice, and mice. The serum samples of patients with chronic hepatitis were extracted from the serum of patients with chronic hepatitis. HCV, NS2, Cre/lox-P, Cre/lox-P, and Tg were extracted from patients with chronic hepatitis. Please make sure that you are aware of the situation and that the PCR method does not allow you to confirm your performance. The results of the analysis are based on the results of the analysis of the results. The results show that you are in the process of maintaining a high level of Tg and 9% of your life. Please confirm that the RT-PCR method is correct, and the mRNA method confirms the error. Please tell me that you have a problem with the law, that you have a problem with the law, and that you are not in a state of health. MRNA

项目成果

T.Wakita, A.Katsume, J.Kato, etc.: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system"J Medical virology. 62. 308-317 (2000)

T.Wakita，A.Katsume，J.Kato等：“细胞毒性T细胞对Cre/loxP系统介导的丙型肝炎病毒cDNA转基因小鼠急性肝损伤的可能作用”J医学病毒学。

Are A. Inoue K. Tanaka T Kato T: "Quantitation of hepatitisB Virus generic DNA by R.T detection PCR"J. Clin Microbilogy. 37(9). 2899-2903 (1999)

Are A. Inoue K. Tanaka T Kato T：“通过 R.T 检测 PCR 定量乙型肝炎病毒通用 DNA”J.