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細胞内および血清中抗酸化生体防御機構の胎生期、小児期での発達と疾患における意識

胚胎期和儿童时期细胞内和血清抗氧化防御机制的发展以及对疾病的认识

基本信息

批准号：
06670779
负责人：
朝山光太郎
金额：
$ 1.34万
依托单位：
山梨医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

ウシ脳ホモジネート脂質自動酸化能(AOA)は新生児期から乳児期に増加して学童期以降は加齢とともに低下した。AOAおよびラジカル消去能総括性(TRAP)は、インスリン依存型糖尿病患児とストレプトゾトシン糖尿病ラットの両方で低下しており、抗酸化機構の異常が糖尿病合併症としての組織傷害に関与する可能性がある。慢性腎不全ではAOAが低下していて、動脈硬化促進などに関与していることが示唆される。細胞内GPXの免疫金粒子ラベル酵素電顕法による検討を、ラット肝および肺胞上皮で行った。肺胞組織では細胞内GPXは肺胞マクロファージに最も多く、次いでII型肺胞細胞に多く、他の細胞種では少なかった。細胞内分布は、肝細胞でも肺胞細胞でも同様で、ミトコンドリアに最も多く、細胞質内と同等量が核内にも分布し、他の細胞内小器官にも依存していた。GPXは二つの細胞内SOD(CuZnSODおよびMnSOD)に一つで対応する分布を示した。組織切片をFITC蛍光染色して、画像解析法で定量化した。細胞内GPXとSODは胎児ラット組織において、在胎15日以降では日齢が進むに従って、酵素も段階的に増加し、相互に協調した生理的変動であった。FPLCを導入して、ラット血漿中GPXを精製した。純品比活性は250単位/mg、精製度は1470倍、収率は19%であった。家兎に免疫して3000倍で組織化学染色とイムノブロットに用いられるポリクローナル抗体を作成した。血漿GPXは23kDaのサブユニットの4量体で、細胞内GPXの22kDaよりは分子量がやや大きく、等電点もやや酸性であり、比活性は大きく異なっていた。細胞内GPXのポリクローナル抗体と血漿GPXとは交差反応性がなかった。血漿GPXは組織化学染色では糸球体にはなく、腎尿細管とヘンレ係蹄に集積していた。血漿GPX値をEIAキットで測定したところ、インスリン投与で血糖コントロールされている患児においては、血漿GPX抗原量は対照児と比較して有意に増加していなかった。

The activity of lipid autoacidification (AOA) increased from neonatal to lactation, and decreased from neonatal to childhood. AOA and anti-acidification activity (TRAP) may be associated with decreased levels of diabetes mellitus and the possibility of tissue damage due to abnormalities in the anti-acidification mechanism. Chronic renal insufficiency is associated with decreased AOA and accelerated atherosclerosis. The intracellular GPX immunogold particles were detected by enzyme electroporation, and the liver and lung epithelium were detected. In the lung tissue, GPX is the most abundant type of lung cell, and the second is the most abundant type of lung cell, and the third is the least abundant type of lung cell. Intracellular distribution is similar to that of liver cells and lung cells, and most of them are distributed in cytoplasm, and the same amount is distributed in nucleus, and other intracellular small organs depend on each other. GPX shows the distribution of two intracellular SOD(CuZnSOD and MnSOD). Tissue sections were quantified by FITC light staining and portrait analysis. The intracellular GPX and SOD are in the process of tissue development, in the process of tissue development after 15 days, in the process of enzyme stage development, in coordination with each other, in the process of physiological activity. FPLC is introduced into plasma and GPX is purified. The pure activity is 250 units/mg, the purity is 1470 times, and the yield is 19%. Immunohistochemical staining was performed at 3000 times and antibodies were prepared. Plasma GPX is 23kDa in size, intracellular GPX is 22kDa in molecular weight, isoelectric point is acidic, specific activity is different. Intracellular GPX and plasma GPX are different in nature. Plasma GPX histochemical staining was used to detect the accumulation of protein in the renal tubule. The plasma GPX level was measured by EIA, and the plasma GPX antigen level was intentionally increased.