HTLV-1 TaxによるLECAM-1プロモーター活性化の分子機構の解析

HTLV-1 Tax激活LECAM-1启动子的分子机制分析

• 批准号: 06671074
• 负责人: 渡辺 俊樹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671074/
• 关键词: L-selectin; HTLV-1 Tax; Transactivation; Ets family oncogene; PEA3

本年度の研究計画では、LECAM-1(L-selectin)プロモーターのTax responsible elementの解析とそれに結合する転写因子の検討を行い、この転写因子の発現を正常リンパ球およびATL腫瘍細胞で解析する予定であった。しかし実際には、5′側からのdeletion seriesを用いたCATアッセイ法では、Tax responsive elementは同定出来なかった。その理由は、deletionの進行にともない反応性が連続的に変化したためであり、特定の領域が反応性を規定しているという結果は得られなかった。これは、複数の転写因子が関与していることを示唆する結果とも考えられる。一方、我々が同定したL-selectinプロモーターの-885bp迄の塩基配列を検討すると、Ets family oncogeneのPEA3/E1A-FおよびPU.1の結合配列が各々7箇所と5箇所存在する。また、5′側からのdeletion seriesを用いたCATアッセイ法で、プロモーターのbasal activityを解析したところ、PEA3結合配列の数に依存することが示された。そこで、PEA3が実際にL-selectinのプロモーター活性を増強するかどうかを、札幌医大藤永教授より供与されたPEA3の発現ベクターpCMVE1A-Fとのco-transfection法によって解析した。その結果PEA3がL-selectinのプロモーターを有意に活性化することが示された。また、GST fusion proteinを用いたGel mobility shift assayとDNase I Foot printing法によりPEA3がこのプロモーターに存在する結合配列と特異的に結合すること、また、この結合能とプロモーターの活性化作用とが対応することをCAT assay法で明らかにした。以上の結果から、L-selecinのプロモーターは、PEA3により活性化されると結論した。mouseからクローニングされたPEA3は、血液系の細胞では発現がみられないと報告されていたため、我々は、Northern blot法でPEA3の発現を解析し、多くのTおよびBリンパ球系と骨髄球系の培養細胞株で発現がみられることを確認し、L-selectinの発現調節に関与する可能性を明らかにした(Tatewaki et al.,submitted for publication)。

Research projects for this year's の で は, LECAM - 1 (L - selectin) プ ロ モ ー タ ー の Tax responsible element analytical と の そ れ に combining す る planning write factor の beg を 検 い, こ の planning write factor の is を 発 the normal リ ン パ ball お よ び ATL cells swollen sores で parsing す る designated で あ っ た. し か し be interstate に は, 5 'side か ら の deletion series を with い た CAT ア ッ セ イ method で は, Tax responsive element は with set out な か っ た. To に そ の reason は, deletion の と も な い anti 応 sex が even 続 に variations change し た た め で あ り, specific の が stipulated 応 sex を し て い る と い う results ら は れ な か っ た. こ れ は, plural の planning write factor が masato and し て い る こ と を in stopping す る results と も exam え ら れ る. Party, I 々 が with fixed し た L - selectin プ ロ モ ー タ ー の - 885 bp to effect の salt base with column を beg す 検 る と, Ets family oncogene の PEA3 / E1A -f お よ び PU 1 の combined with column が each 々 seven と by five existing す る. ま た, 5 'side か ら の deletion series を with い た CAT ア ッ セ イ で, プ ロ モ ー タ ー の basal hominins activity を parsing し た と こ ろ, PEA3 combined with column number の に dependent す る こ と が shown さ れ た. そ こ で, PEA3 が be interstate に L - selectin の プ ロ モ ー タ ー active を raised strong す る か ど う か を, Sapporo yong, a professor at the university's cane よ り さ and supply れ た PEA3 の 発 now ベ ク タ ー pCMVE1A -f と の co - transfection method に よ っ て parsing し た. そ の results PEA3 が L - selectin の プ ロ モ ー タ ー を intentionally に activeness す る こ と が shown さ れ た. Youdaoplaceholder0, GST fusion proteinを using また たGel mobility shift assayとDNase I Foot Printing method に よ り PEA3 が こ の プ ロ モ ー タ ー に exist す る combining with column と specific に す る こ と, ま た, こ の binding energy と プ ロ モ ー タ ー の activation function と が 応 seaborne す る こ と を CAT assay method で Ming ら か に し た. The above <s:1> results によ ら, L-selecin <s:1> プロモ タ タ た た, and the conclusion of PEA3によ activation されると are all た た. Mouse か ら ク ロ ー ニ ン グ さ れ た PEA3 は, blood cell の で は 発 now が み ら れ な い と report さ れ て い た た め, I 々 は, Northern Blot method で PEA3 の 発 now を parsing し, multiple く の T お よ び B リ ン パ ball is と bone marrow is の culture cell lines で 発 now が み ら れ る こ と を confirm し, L - selectin の 発 now adjust に masato and す る possibility を Ming ら か に し た (Tatewaki et al., submitted for (publication).

项目成果

Tatewaki M et al.,: "ATL cells constitutively overexpress L-selectin gene,whose promoter is transactivated by HTLV-1 Tax." AIDS Res.Hum.Retroviruses. 10. S118 (1994)

Tatewaki M 等人：“ATL 细胞组成型过表达 L-选择素基因，其启动子被 HTLV-1 Tax 反式激活。”

Tatewaki M et al.,: "Abnormal expression of L-selectin in ATL cells and transactivation of its gene by HTLV-1 Tax." AIDS Res.Hum.Retroviruses. 10. 446 (1994)

Tatewaki M 等人：“ATL 细胞中 L-选择素的异常表达及其基因被 HTLV-1 Tax 反式激活。”