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潜伏HIV再活性化における細胞周期依存的・選択的CpG脱メチル化機構

潜伏 HIV 重新激活中的细胞周期依赖性和选择性 CpG 去甲基化机制

基本信息

批准号：
13015203
负责人：
渡辺俊樹
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

HIV潜伏感染と再活性化の分子機構を明らかにする目的で、昨年までに、メチル化された潜伏HIVが、シグナル依存的に再活性化に際してCREB/ATF siteのCpGがまず選択的に脱メチル化すること、この部位に特異的に結合する核内タンパク質が存在する事を示した。本年度は、この結合タンパク質の同定を試みるとともに、我々が新たに見い出した、非メチル化HIVプロウイルスをもつ潜伏感染細胞を用いて、メチル化非依存的な潜伏構構について解析を行った。選択的脱メチル化がみとめられるCpGを含むCREB/ATF siteに特異的に結合するタンパク質の同定につては、結合配列のオリゴマーを用いたDNAカラムによる精製とMALDI-TOF質量分析を行っている。一方、メチル化を介さないHIV潜伏機構の解析は、OM10.1を用いて行った。この細胞では潜伏しているHIVの発現が、TNFaやTPA等で活性化される。メチル化を介さない遺伝子発現抑制の機構をhistone codeの観点から検討するために、クロマチン免疫沈降法でLTR上のヒストンのアセチル化状態を解析致した。その結果、転写j開始点近傍のヌクレオソームB(NucB)とU5領域のNucCでは、非刺激時にはH1の結合とH3の低アセチル化が認められ、"repressive histone code"に合致する事、TNFa刺激後は、NucBではH1の解離とH3のアセチル化の亢進が認められ、"permissive histone code"への変換が確認されたがNucC題域ではそのいずれもが認められなかった。H3のリン酸化およびメチル化には変化が認められなかった。以上の結果は、非メチル化HIVの潜伏には抑制的ヒストンコードを介したクロマチンの凝集が関与している事を示している。今後は、repressive codeを解除するシグナル伝達系についての解析を進める予定である。

The molecular mechanism for the reactivation of HIV latent infection is clear that the purpose of the disease, the last year of the virus, the activation of the latent HIV, the reactivation of the virus-dependent reactivation of the international CREB/ATF site, the activation of the CpG, and the combination of the characteristics of the site and the presence of the target in the nucleus. This year, in combination with the results of this year, we have determined that the data will be analyzed in the same way as in the current year, and that we will be able to analyze the data of the latent infection cells that do not depend on each other in the current year. The selected deconstructor CpG contains the CREB/ATF site signature. The combination of the two is the same, and the column configuration is the same. The MALDI-TOF is used to analyze the precision of the MALDI-TOF. On the one hand, the company is responsible for the analysis of the HIV latent mechanism and the use of the OM10.1 system. Active cells, such as latent cells, HIV cells, TNFa cells TPA, etc. The control system was used to prevent histone code infection. The immune sedimentation assay (immunoprecipitation) was used to analyze the state of the disease in LTR. The result of the test, the starting point of near the NucB