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活性酸素生成に関与するB型シトクロム類の比較研究

参与活性氧生成的B型细胞色素的比较研究

基本信息

批准号：
06672227
负责人：
三木俊明
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

NAD(P)Hを光励起すると、NAD(P)・ラジカルなど、非常に還元力の強い分子種が生成する。そこで好中球シトクロムb_<558>とセミキノンの反応のモデル系として、光励起NAD(P)Hの好中球シトクロムbに対する効果を調べた。嫌気条件下、NADPHを共存させ、単波長レーザー光(355nm)の閃光照射後に起こるシトクロムbのスペクトル変化を迅速反応測定装置を用いて記録した結果、NADPラジカルによるシトクロムb_<558>の還元は2次反応として進行し、その反応速度定数は4.3×10^8M^<-1>s^<-1>(pH7.4,20℃)と極めて大きいことが判明した。この結果は、NADPHラジカルが、シトクロムb_<558>のヘムの近傍まで接近することが可能であることを示唆している(Photochem.Photobiol.(1995)印刷中)。また、好中球シトクロムb_<558>のESRスペクトルに対するピリジンの効果を調べた結果、ピリジンの添加によりヘムの配位子がヒスチジンからシステインに変化し、シトクロムP450のヘムとよく似た環境になることが示された(JBC(1995)270:3193)。他方、ミトコンドリアにもエネルギー変換に関与するシトクロムbが存在する(JBC(1994)269:1827)。このシトクロムとNADPHラジカルとの反応を検討した結果、ミトコンドリアシトクロムbではNADPHラジカルによる還元はほとんど進行せず、好中球シトクロムb_<558>とは異なるヘムの存在状態が示唆された。好中球のNADPH依存性フラビン酵素の精製を試みた結果、この酵素はいずれのNAD(P)Hに対するアフィニティカラムにも吸着せず、非常に珍しいタイプのフラビン酵素であることがわかった。このフラビン酵素の部分精製標品と精製シトクロムb_<558>を組み合わせて、分光学的解析が可能な活性酸素生成系を再構成する事ができた。この再構成系の解析から活性酸素生成機構に関し、知見が得られることが今後期待される。

NAD(P)H is excited by light, NAD(P) is excited by light, NAD(P) is excited by light, and NAD (P) is excited by strong molecular species. The <558>optical excitation of NAD(P)H can be adjusted by adjusting the effect of the optical excitation of NAD(P)H. Under ambient conditions, NADPH blue shift, rapid reaction rate determination after flash irradiation with single wavelength light (355nm), NADP blue shift, rapid reaction rate determination, NADP <558><-1>blue shift, rapid reaction rate determination, rapid reaction rate determination<-1>. The results are as follows: NADPH is the most likely candidate for the post <558>(Photochem.Photobiol. (1995) in print). The <558>results of the adjustment of the effect of the ESR on the coordination of the ligand and the addition of the ligand are shown in the following paragraphs (JBC(1995)270:3193). Other parties, such as the United States, the United States, the As a result of this investigation, the state of existence of the NADPH family is displayed<558>. The purification of NADPH-dependent enzymes in the middle of the globe was tested. The results showed that the enzymes were very sensitive to NAD(P)H. Part of the purified standard of this enzyme is composed of purified b_<558>s and spectrally analyzed so that it is possible to reconstruct the active acid production system. The analysis of this recombination system is related to the mechanism of active acid production, and the results are expected in the future.