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溶質トランスポーターの構造と機能に関する比較研究

溶质转运体结构与功能的比较研究

基本信息

批准号：
09257246
负责人：
三木俊明
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257246/
关键词：
糖ヌクレオチドポリアミン輸送体 cDNA 組み替えDNA 強制発現ペプチド抗体

项目摘要

UDP-ガラクトース輸送体、ポリアミン輸送体について次の研究成果を得た。1.UDP-ガラクトース輸送体(UGT):驚異的C末ペプチド抗体を用いて免疫蛍光法による観察を行った結果、ヒトUGTタンパク質の分布は、ゴルジ装置のマーカーの分布とよい一致を示した。さらに、細胞分画を行った結果、UGTタンパク質がガラクトース転移酵素とともにゴルジ膜に局在することを、上記の免疫蛍光法による観察結果とあわせて確立した。この分画法によって得られるゴルジ膜小胞は、非特異的透過性を示さず、またright-side-outで、輸送反応の解析に適した膜標品であることも明らかになった。次に、酵母(Scharomyces cerevisiae)中でヒトUGTを発現させた。酵母の形質転換体から調製した膜画分中にUGTタンパク質が検出された。この膜画分のUGT輸送活性を測定した結果、UGTのORF導入に完全に依存した特異的輸送活性の発現が認められた。2.ポリアミン輸送系尿中ポリアミン成分の分析から、ジアセチルポリアミンが尿路悪性腫瘍の指標として有用であることを明らかになっている。ジアセチル体は尿中より再吸収されないという結果から、尿中のジアセチル体濃度は、主に血液中のポリアミン濃度と尿細管からの分泌により規定されると考えられる。今回は血液中のポリアミンの動態について検討した。ウサギ赤血球画分は、プトレッシンを時間、温度依存的に取り込んだが、その時の取り込み速度は0〜100μMの範囲で直線的に増加した。この取り込みはスペルミン、スペルミジンが共存しても阻害されなかった。他方、スペルミジンも時間、温度依存的に取り込まれた。このスペルミジン取り込みは、スペルミン添加により70%阻害されたが、プトレッシンによっては阻害されなかった。速度論的解析の結果、スペルミジンの取り込み系は少なくとも2種類あること、そのうちの一つのkmは1.5μMであることが示された。以上の結果から、ウサギ赤血球には、スペルミン、スペルミジン特異的輸送系が存在すると考えられる。また、赤血球に解糖系の阻害剤を添加するとスペルミジンの取り込みは低下した。赤血球のポリアミン輸送系には、ATPが必要であると考えられる。

The research results of UDP-ガラクトースTransportation Body and ポリアミンTransportation Bodyについて时の were obtained. 1.UDP-Guretotransporter (UGT): Surprising C-terminal ペプチドantibodies using いてimmune light methodによる観Observe the results of the operation, the distribution of the quality of the UGT, and the consistent distribution of the UGT device.さらに、Cell separation を行った results、UGT タンパク性がガラクトース転转zyme とともにThe ゴルジ Film Bureau was established in することを, and the results of the above-mentioned immunofluorescence method were established.このdivide methodによってgetsられるゴルジmembrane cellsは、non-specific permeabilityをshowsさず、またrigh t-side-out で, transport reaction reaction analysis に Adaptable membrane standard product であることも明らかになった. Second, yeast (Scharomyces cerevisiae) is in UGT. The shape of the yeast is transformed into a modified form, and the film is divided into two parts. The results of the determination of UGT transport activity by membrane drawing and the complete dependence of the introduction of UGT ORF on the specific transport activity are confirmed. 2. Analysis of the ingredients of ポリアミン in urine by ポリアミン delivery systemから、ジアセチルポリアThe indicators of urinary tract ulcers are useful. Urinary body reabsorption results, urine body concentration , the main concentration of のポリアミン in the blood and the secretion of urinary capillaries are regulated by the されると考えられる. This time, the animation in the blood will be updated.ウサギerythrocyte drawing points, プトレッシンを time and temperature dependent に澼んだが, the speed of the time is 0~100μM, and the range is straight line. The coexistence of the り込みはスペルミン and the スペルミジンが is the hindrance of the されなかった. Other side, スペルミジンもtime and temperature dependent に抾込まれた.このスペルミジンtakes り込みは, スペルミン adds により70% Blocking されたが, blocking されなかった. Analysis result of velocity theory, 2 types of スペルミジンのtake り込みsystem は小なくともあること、そのうちの一つのkmは1.5μM であることが Show された. As a result of the above, there is a specific transport system for から, ウサギerythroblast には, スペルミン, スペルミジンが.また、Erythrocytic and erythrocytic glycolysis inhibitors are added to the するとスペルミジンのtake り込みは low した. Erythrocyte transport system and ATP necessary test.