ブタ卵子表層顆粒中の多精防御物質(PPS)の構造と活性発現機構

猪卵母细胞表面颗粒多精保护物质(PPS)的结构及活性表达机制

• 批准号: 06806014
• 负责人: 河岸 洋和
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06806014/
• 关键词: 多精; ブタ卵子

卵子に精子が侵入すると卵子中の表層顆粒が囲卵腔内へ放出され、このことが多精子受精を防ぐ一つの要因となっている。しかし、表層顆粒中のどのような物質が関与しているのかは不明であった。本研究では,このブタ卵子中の活性物質(多精防御物質,polyspermy preventing substance;PPS)の精製を行い、構造と活性発現メカニズムを明らかにしようとしたものである。以下にその結果を述べる。1)単離・精製: ブタ卵巣は屠殺場にて採取し、直ちに卵子を取り出し、卵丘細胞と透明帯を物理的に除去し,このようんにして得られた卵子をりん酸中で破砕し抽出した。その抽出液から,PNAをリガンドとしたアフィニティークロマトグラフィー,MonoQカラムを用いたFPLC,逆相系カラムを用いたHPLC等を駆使して,活性物質の単離を行った。その結果,SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって単一バンドになるまで精製することができた。2)構造決定: 予備実験からこの物質は糖蛋白質と考えられ,まず蛋白質部分の構造を明らかにするため、未変性のPPSあるいは酵素消化したペプチドのシークエンシングを試みた。その結果、一部の1次構造を決定することができた。3)活性発現機構: PPSの人口受精培地の添加によって多精を防御できるこたが確認された、また,この物質の性質を様々な角度から検討した結果,PPSは酵素活性(N-アセチルヘキソサミニダーゼ活性)を有することが推定された。

Sperm invasion of the egg, release of surface particles from the egg cavity, and prevention of polyspermia are important factors. The material in the surface particles is not clear. In this study, the purification, structure and activity of the active substance (polyspermy preventing substance;PPS) in the ovum were studied. The results are described below. 1) Separation and refinement: egg extraction, cumulus cell extraction, and physical removal of egg extraction. The extraction solution is separated from the active substance by FPLC, reverse-phase HPLC, etc. As a result, SDS-free electrophoresis was carried out in a refined manner. 2)Structural determination: preparation of the substance, glycoproteins, and protein components of the structure, the nature of PPS, and enzyme digestion. The results of the first order structure of the first part are determined. 3)Activity development mechanism: PPS population fertilization culture in the addition of polysperms defense, this is confirmed, and also, the nature of the substance, the results of the study,PPS enzyme activity (N-C-C-