植物ポリケタイド生合成酵素反応の立体化学

植物聚酮化合物生物合成酶反应的立体化学

• 批准号: 06807161
• 负责人: 渋谷 雅明
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06807161/
• 关键词: カルコン合成酵素; スチルベン合成酵素; 還元酵素; クローニング; 発現; 立体化学

カルコン合成酵素の大量調製クズ培養細胞からクローニングしてあるカルコン合成酵素のcDNAを発現ベクター(pET)に組込み、大腸菌に導入した。発現を誘導し、カルコン合成酵素を大腸菌に作らせ、酵素活性をもつカルコン合成酵素の大量調製に成功した。現在、大腸菌に発現させたカルコン合成酵素の精製を行っている。スチルベン合成酵素の大量調製ピ-ナツより得られているスチルベン合成酵素のcDNAの塩基配列は、既に報告されている。このcDNAの開始コドンから20塩基、及び、終止コドン直前の20塩基をプライマーにして、ピ-ナツのcDNAを鋳型にPCRを行い、cDNAクローンを得た。得られたピ-ナツのスチルベン合成酵素の還元酵素のcDNAの全塩基配列を決定したところ、報告されているピ-ナツのスチルベン合成酵素のcDNAと98%のホモロジーを示した。カルコン合成酵素と同じ様に、発現ベクター(pET)に組込み、大腸菌に導入した。発現を誘導後、大腸菌のホモジェネートの活性を調べたところ、スチルベン合成酵素の酵素活性を検出することができた。今後、スチルベン合成酵素の精製を行う予定である。還元酵素の大量調製大豆より得られている還元酵素のcDNAの塩基配列は、既に報告されている。スチルベン合成酵素同様に、このcDNAの開始コドンから20塩基、及び、終止コドン直前の20塩基をプライマーにして、クズcDNAを鋳型にPCRを行い、クズの還元酵素のcDNAを得た。得られたクズの還元酵素のcDNAを用いて、カルコン合成酵素と同じ様に大腸菌に作らせ、還元酵素を大量発現に成功した。カルコン合成酵素の反応、GC-MSによる解析(S)及び(R)カイラルマロニールCoAとp-クマル酸CoAを基質としてカルコン合成酵素およびスチルベン合成酵素の反応の反応を行うには、重水素の保持率は極めて重要であり、重水素の保持率を高めるために酵素反応の条件を最適化の検討を行った。現在のところ、カルコン合成酵素の反応において、生成物の重水素の保持率は20%程度であり、今後、酵素反応条件の最適化を続ける必要があると思われる。

A large number of modulation of the gene synthase in cultured cells was carried out. The gene expression of the gene synthase in cultured cells was detected by pET. A large number of successful modulation of induction, enzyme activity and enzyme synthesis in Escherichia coli Now, E. coli development and purification of the enzyme synthesis process. A large number of regulatory enzymes of the gene synthesis enzyme are reported in this paper. This cDNA starts at the 20th base, ends at the 20th base, and ends at the 20th base. The complete nucleotide sequence of cDNA of reductase was determined by the method of DNA sequencing. 98% of cDNA of reductase was determined by DNA sequencing. The enzyme of the same kind, the development of the enzyme (pET), the introduction of Escherichia coli After induction, the activity of Escherichia coli is regulated, and the activity of Escherichia coli synthase is regulated. In the future, the purification of synthetic enzymes will be determined. A large number of soybean enzymes have been prepared by sequencing the nucleotide sequences of the reductase cDNA. The cDNA of the first and second genes of the first and third genes of the first and fourth genes of the first and fourth genes of the A large amount of the cDNA of the enzyme was successfully expressed in E. coli. The enzyme reaction, GC-MS analysis (S) and (R) matrix of the enzyme reaction, the retention rate of the heavy water element, the high retention rate of the heavy water element, and the optimization of the enzyme reaction conditions were discussed. Now, the enzyme reaction, the retention rate of the product is 20%, and in the future, the enzyme reaction conditions are optimized.

项目成果

M.Kusano,M.Shibuya,U.Sankawa and Y.Ebizuka: "Molecular Cloning of cDNA Encoding Rat 2,3-Oxidosqualene:Lanosterol Cyclase" Biol.Pharm.Bull.18. 195-197 (1995)

M.Kusano、M.Shibuya、U.Sankawa 和 Y.Ebizuka：“编码大鼠 2,3-氧化角鲨烯：羊毛甾醇环化酶 cDNA 的分子克隆”Biol.Pharm.Bull.18。