ゲノム情報を利用した新規トリテルペンサポニンの探索

利用基因组信息寻找新的三萜皂苷

• 批准号: 18032024
• 负责人: 渋谷 雅明
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18032024/
• 关键词: オキシドスクアレン閉環酵素; シロイヌナズナ; β-アミリン合成酵素; トリテルペン配糖化酵素; ダイズ; ソヤサポニン; トリテルピン; 水酸化酵素; CYP93E1; イソマルチフロレノール

1シロイヌナズナの13種のオキシドスクアレン閉環酵素遺伝子の機能解析シロイヌナズナの全ゲノムが解読され、13種のオキシドスクアレン閉環酵素遺伝子の存在が判明した。昨年度までの研究によりそれらの酵素機能の同定がほぼ完了し、未同定のものは、2種のホモログのみとなった。本年度は、これら2種のホモログについて機能の同定を試みた。ゲノム配列を基にORFを予想し、プライマー設計した。cDNAプールを鋳型にPCRを行いホモログのcDNAを増幅し、5種の遺伝子を得た。それらを、酵母の発現ベクターに組み込み、ラノステロール合成酵素欠損の酵母変異株に導入し、生成物の単離後、各種スペクトルを測定し構造を決定した。その結果、Atlg79850はβ-アミリン合成酵素であることが判明した。しかし、残るAt5g36150は、これまでのところ同定には至っていない。一方、データベースを詳細に解析したところ、シロイヌナズナには、14番目のオキシドスクアレン閉環酵素のホモログ(At3g29255)が存在することが判明した。今回、機能同定できなかったものと、新たに見いだしたホモログの機能同定が今後の課題と思われる。2トリテルペン配糖化酵素のクローニングソヤサポニンを生産するダイズのEST情報を基にクローニングを試みた。ダイズは主としてソヤサポニンを大量に生産している。ダイズには167種の配糖化酵素と思われるESTが存在する。高発現しているものを10種に絞り込み、PCRで全長クローンを増幅し、大腸菌で発現させ、機能の同定を試みた。その結果、第二配糖化酵素、第三配糖化酵素の同定に成功した

The functional analysis of 13 kinds of closed-loop enzyme genes of 1 kind of enzyme genes was carried out. The existence of 13 kinds of closed-loop enzyme genes was identified. In the past year, the research on the enzyme function has been carried out in the same way, and the enzyme function has been determined in the same way. This year, two kinds of The basic ORF is designed to be arranged cDNA amplification was carried out by PCR and 5 kinds of cDNA fragments were obtained. In addition, the yeast production process, the enzyme synthesis process, the yeast mutant introduction process, the product isolation process, and the structure determination process were determined. Atlg 79850 was identified as a β-amyloid synthase. At5g36150 A detailed analysis of a party, data, information, information Today, the function is the same as that of the future, and the function is the same as that of the future. 2. Selection of enzymes for production. Selection of ESTs. Selection of enzymes for production. The main reason for this is that we have a lot of production. There are 167 kinds of glycosylating enzymes and ESTs in Dainian. The 10 kinds of PCR products were detected by PCR, the length of PCR products was increased, the expression of E. coli was detected, and the function was determined. The identification of the second glycosylation enzyme and the third glycosylation enzyme was successful.

项目成果

Origin of structural diversity in natural triterpenes:: Direct synthesis of seco-triterpene skeletons by oxidosqualene cyclase

• DOI: 10.1021/ja066873w
• 发表时间: 2007-02-07
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
• 影响因子: 15
• 作者: Shibuya, Masaaki;Xiang, Ting;Ebizuka, Yutaka
• 通讯作者: Ebizuka, Yutaka

Identification of β-Amyrin and Sophoradiol 24-Hydroxylase by EST Mining and Functional Expression Assay

EST挖掘和功能表达分析鉴定β-香树脂醇和槐二醇24-羟化酶

• 发表时间: 2006
• 期刊: FEBS Journal 273(5)
• 作者: Masaaki Shibuya

Squalene cyclase and oxidosqualene cyclase from a fern

• DOI: 10.1016/j.febslet.2007.12.023
• 发表时间: 2008-01-01
• 期刊: FEBS LETTERS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Shinozaki, Junichi;Shibuya, Masaaki;Ebizuka, Yutaka
• 通讯作者: Ebizuka, Yutaka

Production of triterpene acids by cell suspension cultures of Olea europaea

• DOI: 10.1248/cpb.55.784
• 发表时间: 2007-05-01
• 期刊: CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN
• 影响因子: 1.7
• 作者: Saimaru, Hiroshi;Orihara, Yutaka;Ebizuka, Yutaka
• 通讯作者: Ebizuka, Yutaka

Molecular cloning and functional expression of a multifunctional triterpene synthase cDNA from a mangrove species Kandelia candel (L.) Druce

• DOI: 10.1016/j.phytochem.2006.09.016
• 发表时间: 2006-12-01
• 期刊: PHYTOCHEMISTRY
• 影响因子: 3.8
• 作者: Basyuni, Mohammad;Oku, Hirosuke;Ebizuka, Yutaka
• 通讯作者: Ebizuka, Yutaka