両生類初期胚細胞接着機構研究の進展開-ヒト血液型物質含有糖蛋白質の分析-

两栖类早期胚胎细胞粘附机制研究进展-含人血型物质的糖蛋白分析-

• 批准号: 06808077
• 负责人: 野村 一也
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06808077/
• 关键词: カドヘリン; 細胞接着分子; アフリカツメガエル; ヒト血液型物質; B型血型液物質; 糖蛋白質; 糖脂質

私たちは、ヒト血液型糖鎖が両生類の初期胚においてカルシュウム依存性の細胞接着物質として機能していることを見出だした。ヒト血液型B型物質に対するモノクローナル抗体は初期胚のカルシュウム依存性細胞接着を完全に阻害する。精製B型物質の培養液への添加も細胞接着を完全に阻害しまたモノクローナル抗体のFabもカルシュウム依存性細胞接着を完全に阻害できる事が判明した。したがってこの阻害効果は単なる抗体による細胞接着分子の機能の立体障害によるのでは無いと結論された。またB型糖鎖はアフリカツメガエルの糖脂質と糖蛋白質両方に存在していることが分かっており、糖脂質の完全構造決定結果を発表した。また両生類の初期胚にはカルシュウム依存性細胞接着因子カドヘリンが存在するが今回の研究ではXBカドヘリンという私たちのクローニングしたカドヘリン遺伝子の全長クローンを哺乳類細胞L細胞に発現させたものを利用し、このカドヘリンに対する機能阻害モノクローナル抗体を作成した。この抗体はアフリカツメガエルのカルシュウム依存性細胞接着を阻害する生理効果を有している。また同時にカエルの膜分画で免疫感作することでヒト血液型B型糖鎖に対するモノクローナル抗体も作成した。この抗体もカルシュウム依存性細胞接着を阻害する。この2種の抗体を利用した二重染色によって胞胚のおいてB型糖鎖と、XBカドヘリンが膜表面上で相互作用していることを明らかにした。またヒトB型血液型糖鎖を有している糖蛋白質の二次元電気泳動やHPLCによる分析を行い、現在糖蛋白質の部分的アミノ酸配列の決定を行っている。現在までの結果からB型糖鎖を有する糖蛋白質には分子シャペロンとして働いているものが存在するらしいことが判明している。またEGFリセプターもB型糖鎖で修飾されているようであり、現在カドヘリン・EGFリセプター・シャペロンの作り出す超分子複合体を解析中である。

In the early stages of development, the blood-type glycogen chain was found to be dependent on cell adhesion substances and functions. Antibodies against blood-type B substances can completely inhibit the development of embryonic cell-dependent cells. It was found that the addition of purified B type substance to culture medium completely inhibited cell growth and then completely inhibited cell growth and development. The results showed that the antibody could inhibit the function of cell adhesion molecules. The results of the complete structural determination of glycolipid are shown in the following table. In this paper, we study the development of XB gene and its dependent cell adhesion factor in mammalian L cells. We also study the development of XB gene and its dependent cell adhesion factor. These antibodies are responsible for the physiological effects of cell dependence and subsequent inhibition. At the same time, the immune response of blood type B glycoprotein was studied. This antibody is responsible for the subsequent inhibition of cell-dependent cell death. These two antibodies interact with each other on the surface of the membrane by double staining. The analysis of B-type glycoproteins by two-dimensional electrokinetic HPLC was performed to determine the partial acid alignment of glycoproteins. As a result, the presence of B-type glycoproteins was identified. The EGF gene is used to analyze supramolecular complexes.

项目成果

Nomura,K.: "Occurrence of a novel fucose‐containing pentaglycosylceramide with blood‐group‐B active determinant in Xenopus blastula cells:its possible involvement in cell‐cell adhesion." Biochem.J.306. 821-827 (1995)

Nomura, K.：“爪蟾囊胚细胞中含有 B 型血活性决定簇的新型含岩藻糖五糖基神经酰胺：其可能参与细胞-细胞粘附。Biochem.J.306 (1995)。”