プロスタグランジン代謝におけるジヒドロジオール脱水素酵素の生理的意義と触媒機構

二氢二醇脱氢酶在前列腺素代谢中的生理意义及催化机制

• 批准号: 07672368
• 负责人: 出屋敷 喜宏
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Gifu Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672368/
• 关键词: ジヒドロジオール脱水素酵素; キメラ酵素

一次構造が未解析であったヒト肝ジヒドロジオール脱水素酵素DD1について、リシルエンドペプチターゼ消化断片の解析を行った。その結果、決定された277残基のアミノ酸配列は、既報のcDNAクローンC9から推定されるアミノ酸配列と一致することが明らかになった。同様に、ヒト肝DD2についても294残基を解析し、その配列はcDNAクローンc81/RACEでコードされるタンパク質と一致することも明らかにした。以上のように、蛋白質化学的解析結果に基づいて、DD2およびヒト肝胆汁酸結合蛋白質のcDNAとされていたものは、実際にはDD1をコードすること、またDD2はc81/RACEのコードする蛋白質は同一であることを示した。肝機能診断薬であるブロモスルフォフタレインの酵素活性に及ぼす影響を検討し、本化合物はDD4を活性化し、本化合物の構造類縁体であるフェノールフタレインがDD4の強力な阻害剤であることを見い出した。反応速度論的解析から、フェノールフタレインは酵素・補酵素複合体を形成している酵素の基質結合ポケットの中または近傍に結合するものと考えられた。また、DD4による還元代謝を受ける薬物ケトンとブロモフルフォフタレインの同時投与の場合には、薬物ケトンの代謝が著しく変化し、予期しない副作用の出現に至る可能性が示唆された。ヒト肝DD4のC末端側39残基をDD1の相当部分と置換したキメラ酵素について、各種胆汁酸に対する反応性を検討し、置換したC末端部分が7β-および12α-水酸基をもつステロイド分子に対する特異性に関与することを見い出した。また、DD4に対して強力な阻害剤となるステロイド系抗炎症剤による影響を反応速度論的に解析し、C末端部分が非競合または不競合阻害を示すステロイド系阻害剤との結合に大きく関与することを明らかにし、その結合部位も立体的には活性部位近傍に存在することを示唆した。

The primary structure of the enzyme DD1 is not resolved. The results showed that the nucleotide sequence of residue 277 was consistent with that of the reported cDNA sequence C9. Analysis of the 294 residues in the cDNA sequence of c81/RACE The above results of protein chemistry analysis show that DD2 and c81/RACE are the same protein. To investigate the enzyme activity and the effect of DD4 on liver function diagnosis, this compound activates DD4, and the structure of this compound is similar to that of DD4. The analysis of the reverse velocity theory shows that the enzyme complex is formed in the middle of the matrix. The possibility of side effects due to metabolic changes of the drug substance and the simultaneous administration of the drug substance is indicated. The 39th residue on the C-terminal side of liver DD4 was replaced by a substantial portion of DD1 in kefir enzymes, and the reactivity with various bile acids was investigated. It was found that the replacement of the C-terminal portion is related to the specificity of the 7β-and 12α-carboxylic acid groups for the mammalian molecule. The analysis of the effect of the anti-inflammatory agent on DD4 shows that the anti-inflammatory agent has a large effect on DD 4 and that the active site is close to DD 4.

项目成果

Kazuya Matsuura: "Activation of human liver 3α-hydroxysteroid dehydrogenase by sulphobromophthalein" Biochem.J.313. 179-184 (1996)

Kazuya Matsuura：“磺溴酞激活人肝脏 3α-羟基类固醇脱氢酶”Biochem.J.313 (1996)。