ウイルス遺伝子の非特異的な発現を抑制可能な次世代アデノウイルスベクターの作製

构建可抑制病毒基因非特异性表达的下一代腺病毒载体

• 批准号: 15H06363
• 负责人: 町谷 充洋
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06363/
• 关键词: アデノウイルス; 遺伝子治療; バイオテクノロジー; NF-kB

遺伝子治療研究ならびに基礎研究に汎用されている従来の非増殖型アデノウイルス (Ad) ベクターは、他のAd遺伝子の発現を誘導するE1遺伝子を欠損させることで、理論上Ad遺伝子が発現しないように設計されている。しかし、実際はE1遺伝子非依存的にAd遺伝子がわずかに発現し、免疫応答および組織傷害を誘導することが問題となっている。これまでに我々は、他のAd遺伝子の発現を制御すると報告されているE2遺伝子のプロモーター配列に、NF-kB結合配列があることを見出した。そこで本研究では、NF-kBがAd遺伝子の非特異的な発現を誘導しているか検討した。リコンビナントTNF-aを作用させてNF-kBを活性化した培養細胞にAdベクターを作用させたところ、Ad遺伝子の有意な発現上昇が見られた。一方、NF-kB阻害剤を作用させたところ、Ad遺伝子の非特異的な発現が有意に低下した。さらに、リコンビナントTNF-aとAdベクターをマウスに同時に静脈内投与したところ、Adベクター単独投与群と比較して、有意に高いAd遺伝子の発現が見られた。同様の結果が野生型Adを用いた検討でも得られた。さらに、NF-kB阻害活性を有するドミナントネガティブIkBaを発現するAdベクター（Ad-DNIkBa）を開発し、Ad遺伝子の発現ならびにAdベクター投与後の肝障害を検討した。Ad-DNIkBaを培養細胞もしくはマウスに作用させたところ、従来型Adベクターと比較して、Ad遺伝子の非特異的な発現が有意に抑制された。さらに、従来型Adベクターの投与ではALT・AST値の有意な上昇、すなわち肝障害が誘導されたのに対し、Ad-DNIkBaではそれらの上昇は全く見られず、肝障害が抑制されていることが示唆された。以上より、NF-kBがAd遺伝子の非特異的な発現を誘導することが明らかとなった。さらに、NF-kB阻害活性を有するAdベクターは、Ad遺伝子の非特異的な発現が抑制されているため、肝障害性が低く、安全性が高いことが示された。

Basic research on the treatment of leftover childrenベクターは、his のAd 伝子の発 appear をinducing するE1 伝子を无码させることで、Theoretically Ad 伝子が発行しないようにDesign されている.しかし, 実记はE1缝子不dependent にAd缝子がわずかに発appearし, immune 応answer およびtissue damage をinduced することがquestion となっている. E2 The remaining のプロモーターalignment, NF-kB binding alignment があることを见出した. This study is based on the non-specific non-specific induction of NF-kB Ad and the absence of NF-kB.リコンビナントTNF-a action and NF-kB activation and cultured cells Ad ベクターを Effect させたところ, Ad 伝子の有purpose な発 appear to rise が见られた. On the one hand, the NF-kB inhibitor has a negative effect, and the non-specific effect of Ad is low.さらに、リコンビナントTNF-aとAdベクターをマウスにに intravenously administered with したところ、Adベクター単婷与组とComparisonして、有purpose的に高いAd出伝子の発现が见られた. The result of the same wild-type Ad is the same as that of the wild-type Ad.さらに、NF-kB inhibitory activity するドミナントネガティブIkBaを発成するAdベクター（A d-DNIkBa) を开発し、Ad 缝子の発 appear ならびにAdベクターAfter the investment, the liver disorder を検 Discussion した. Ad-DNIkBa's cultured cells are used for cultured cells, and they are derived types. Ad ベクターと comparison して, Ad 伝子の non-specific な発appears が intentional に された.さらに, 従来type Adベクターのinvestment and ではALT・ASTつのIntentional rise, すなわちLiver damage がinducing されたのに対し, Ad-DNIkBa ではそれらのrise は全く见られず, Liver disorder が suppress されていることが Show instigation された. The above-mentioned NF-kB and NF-kB Ad genes are non-specific and can induce NF-kB.さらに、NF-kB inhibitory activity するAdベクターは、Ad 缝子のnon-specific It shows that the disease is suppressed, the liver damage is low, and the safety is high.

项目成果

Expression profile of virus-associated RNAI following transduction with a replication-incompetent adenovirus vector in vitro and in vivo.

在体外和体内用无复制能力的腺病毒载体转导后病毒相关 RNAI 的表达谱。

• 发表时间: 2015
• 作者: Keisaku Wakabayashi;Mitsuhiro Machitani;Kahori Shimizu;Masashi Tachibana;Fuminori Sakurai;Hiroyuki Mizuguchi
• 通讯作者: Hiroyuki Mizuguchi

アデノウイルス由来小分子RNAの機能特性に立脚した遺伝子治療用組み換えウイルスの開発

基于腺病毒衍生小RNA的功能特性开发用于基因治疗的重组病毒

• 发表时间: 2015
• 作者: 町谷充洋;櫻井文教;若林圭作;立花雅史;藤原俊義;水口裕之
• 通讯作者: 水口裕之

Inhibition of NF-κB leads to suppression of Ad vector-mediated hepatotoxicities via reduction in the leaky expression of Ad genes

抑制 NF-κB 通过减少 Ad 基因的渗漏表达来抑制 Ad 载体介导的肝毒性

• 发表时间: 2015
• 作者: Mitsuhiro Machitani;Fuminori Sakurai;Keisaku Wakabayashi;Masashi Tachibana;Hiroyuki Mizuguchi
• 通讯作者: Hiroyuki Mizuguchi

NF-κB promotes leaky expression of adenovirus genes in a replication-incompetent adenovirus vector.

• DOI: 10.1038/srep19922
• 发表时间: 2016-01-27
• 期刊: Scientific reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Machitani M;Sakurai F;Wakabayashi K;Nakatani K;Shimizu K;Tachibana M;Mizuguchi H
• 通讯作者: Mizuguchi H

Quantitative Analysis of Virus-associated RNAI Expression following Transduction with a Replication-incompetent Adenovirus Vector In Vitro and In Vivo.

在体外和体内用无复制能力的腺病毒载体转导后病毒相关 RNAI 表达的定量分析。

• DOI: 10.4172/1747-0862.1000169
• 发表时间: 2015
• 期刊: J. Mol. Genet. Med.
• 作者: Wakabayashi K.;Machitani M.;Shimizu K.;Tachibana M.;Sakurai F.;Mizuguchi H.
• 通讯作者: Mizuguchi H.