ウイルス遺伝子の非特異的な発現を抑制可能な次世代アデノウイルスベクターの作製

构建可抑制病毒基因非特异性表达的下一代腺病毒载体

• 批准号: 15H06363
• 负责人: 町谷 充洋
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06363/
• 关键词: アデノウイルス; 遺伝子治療; バイオテクノロジー; NF-kB

遺伝子治療研究ならびに基礎研究に汎用されている従来の非増殖型アデノウイルス (Ad) ベクターは、他のAd遺伝子の発現を誘導するE1遺伝子を欠損させることで、理論上Ad遺伝子が発現しないように設計されている。しかし、実際はE1遺伝子非依存的にAd遺伝子がわずかに発現し、免疫応答および組織傷害を誘導することが問題となっている。これまでに我々は、他のAd遺伝子の発現を制御すると報告されているE2遺伝子のプロモーター配列に、NF-kB結合配列があることを見出した。そこで本研究では、NF-kBがAd遺伝子の非特異的な発現を誘導しているか検討した。リコンビナントTNF-aを作用させてNF-kBを活性化した培養細胞にAdベクターを作用させたところ、Ad遺伝子の有意な発現上昇が見られた。一方、NF-kB阻害剤を作用させたところ、Ad遺伝子の非特異的な発現が有意に低下した。さらに、リコンビナントTNF-aとAdベクターをマウスに同時に静脈内投与したところ、Adベクター単独投与群と比較して、有意に高いAd遺伝子の発現が見られた。同様の結果が野生型Adを用いた検討でも得られた。さらに、NF-kB阻害活性を有するドミナントネガティブIkBaを発現するAdベクター（Ad-DNIkBa）を開発し、Ad遺伝子の発現ならびにAdベクター投与後の肝障害を検討した。Ad-DNIkBaを培養細胞もしくはマウスに作用させたところ、従来型Adベクターと比較して、Ad遺伝子の非特異的な発現が有意に抑制された。さらに、従来型Adベクターの投与ではALT・AST値の有意な上昇、すなわち肝障害が誘導されたのに対し、Ad-DNIkBaではそれらの上昇は全く見られず、肝障害が抑制されていることが示唆された。以上より、NF-kBがAd遺伝子の非特異的な発現を誘導することが明らかとなった。さらに、NF-kB阻害活性を有するAdベクターは、Ad遺伝子の非特異的な発現が抑制されているため、肝障害性が低く、安全性が高いことが示された。

Gene therapy research and basic research are widely used in the field of gene therapy, including the induction of non-clonal gene expression and the design of gene expression in theory. In fact, E1-dependent ad-hoc vectors appear, immune response and tissue injury induction are problematic. This report describes how to control the occurrence of E2 gene and NF-kB gene. In this study, NF-kB was used to induce the non-specific expression of Ad gene. The effect of TNF-a on the activity of NF-kB in cultured cells was observed. On the one hand, the role of NF-kB inhibitors has been intentionally reduced, and the non-specific occurrence of Ad vectors has been intentionally reduced. In addition, the occurrence of TNF-a and Ad hoc genes in intravenous injection and group injection is also observed. The same results were obtained with wild-type Ad. In addition, NF-kB inhibition activity has been developed in the presence of Ad-DNIkBa, Ad- Ad-DNIkBa can be used to inhibit nonspecific expression of Ad-DNA in cultured cells. In addition, the increase in ALT and AST values due to adverse reactions, adverse reactions due to adverse reactions, adverse reactions due to adverse reactions due to adverse reactions, adverse reactions due to adverse reactions due to adverse reactions, and adverse reactions due to adverse reactions. The above, NF-kB and Ad vectors are induced by non-specific phenomena. In addition, NF-kB inhibition activity is low, non-specific occurrence of Ad gene is inhibited, liver toxicity is low, and safety is high.

项目成果

Expression profile of virus-associated RNAI following transduction with a replication-incompetent adenovirus vector in vitro and in vivo.

在体外和体内用无复制能力的腺病毒载体转导后病毒相关 RNAI 的表达谱。

• 发表时间: 2015
• 作者: Keisaku Wakabayashi;Mitsuhiro Machitani;Kahori Shimizu;Masashi Tachibana;Fuminori Sakurai;Hiroyuki Mizuguchi
• 通讯作者: Hiroyuki Mizuguchi

アデノウイルス由来小分子RNAの機能特性に立脚した遺伝子治療用組み換えウイルスの開発

基于腺病毒衍生小RNA的功能特性开发用于基因治疗的重组病毒

• 发表时间: 2015
• 作者: 町谷充洋;櫻井文教;若林圭作;立花雅史;藤原俊義;水口裕之
• 通讯作者: 水口裕之

NF-κB promotes leaky expression of adenovirus genes in a replication-incompetent adenovirus vector.

• DOI: 10.1038/srep19922
• 发表时间: 2016-01-27
• 期刊: Scientific reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Machitani M;Sakurai F;Wakabayashi K;Nakatani K;Shimizu K;Tachibana M;Mizuguchi H
• 通讯作者: Mizuguchi H

Inhibition of NF-κB leads to suppression of Ad vector-mediated hepatotoxicities via reduction in the leaky expression of Ad genes

抑制 NF-κB 通过减少 Ad 基因的渗漏表达来抑制 Ad 载体介导的肝毒性

• 发表时间: 2015
• 作者: Mitsuhiro Machitani;Fuminori Sakurai;Keisaku Wakabayashi;Masashi Tachibana;Hiroyuki Mizuguchi
• 通讯作者: Hiroyuki Mizuguchi

Quantitative Analysis of Virus-associated RNAI Expression following Transduction with a Replication-incompetent Adenovirus Vector In Vitro and In Vivo.

在体外和体内用无复制能力的腺病毒载体转导后病毒相关 RNAI 表达的定量分析。

• DOI: 10.4172/1747-0862.1000169
• 发表时间: 2015
• 期刊: J. Mol. Genet. Med.
• 作者: Wakabayashi K.;Machitani M.;Shimizu K.;Tachibana M.;Sakurai F.;Mizuguchi H.
• 通讯作者: Mizuguchi H.