アデノウイルス由来小分子ＲＮＡ（ＶＡ－ＲＮＡ）の機能解析と新規ベクターの開発

腺病毒来源的小RNA（VA-RNA）的功能分析和新载体的开发

基本信息

批准号：
12J01471
负责人：
町谷充洋
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J01471/
关键词：
Adベクター VA-RNA shRNA miRNA

项目摘要

アデノウイルス（Ad）由来小分子RNAであるVA-RNAは転写後、Dicerに切断されて約21塩基のmicroRNA（mivaRNA）になる。近年、いくつかのウイルスの増殖にmiRNAプロセシング因子が関わることが報告された。例えば、miRNAプロセシング因子のひとつであるDicerに変異を持つマウスにおいて、ヘルペスウイルスの増殖が促進されることが報告されている。一方で、Adの増殖にこのようなmiRNAプロセシング因子の発現が関与しているかは明らかにされていない。そこで本研究では、Adの増殖にこれらの因子が関わるのかを検討するために、Dicerをノックダウン、もしくは強制発現させた細胞におけるAdの増殖について検討した。Dicerをノックダウンした細胞では、ノックダウンしていない細胞と比較して、野生型Adの増殖が約5倍促進された。一方、Dicerの強制発現させた細胞ではAdの増殖が1/3~2/3程度に抑制された。過去にVA-RNAが転写後、Dicerに切断されてmivaRNAになることが報告されていたので、次にDicerノックダウン細胞におけるVA-RNAコピー数を定量した。Dicerをノックダウンしたところ、VA-RNAコピー数が有意に増加するとともに、その切断体であるmivaRNAコピー数が顕著に低下した。即ち、Dicerに切断されることで細胞内のVA-RNAコピー数が減少することが示唆された。以上の結果より、DicerはAd増殖に必須の因子であるVA-RNAを切断することで、Adの増殖を負に制御していること、また、DicerのノックダウンがAdの増殖を促進することが明らかとなった。

VA-RNA是一种衍生自腺病毒（AD）的小分子RNA，在转录后通过DICER裂解，将其变成大约21个碱基的microRNA（mivarna）。最近，据报道，miRNA加工因子与几种病毒的增殖有关。例如，据报道，在MiRNA加工因子之一的DICER中携带突变的小鼠中促进了疱疹病毒的增殖。另一方面，尚未揭示这种miRNA加工因子的表达是否涉及AD的增殖。因此，在这项研究中，为了研究这些因素是否与AD增殖有关，我们研究了DICER被击倒或强迫表达的细胞中AD的增殖。与非敲低细胞相比，迪切尔敲低细胞促进了野生型AD增殖的五倍。另一方面，在由迪切尔（Dicer）强迫表达的细胞中，AD增殖被抑制至大约1/3至2/3。过去据报道，转录后迪切尔（Dicer）裂解VA-RNA以形成Mivarna，因此然后对DICER敲低细胞中的VA-RNA拷贝数进行定量。当dicer被击倒时，VA-RNA拷贝的数量显着增加，而Mivarna拷贝的数量（即裂解）显着减少。也就是说，有人提出，当用DICER裂解时，细胞中的VA-RNA拷贝数减少。从上述结果中可以揭示出DICER通过切割VA-RNA（对AD增殖至关重要的因素）来负面调节AD的增殖，并且DICER敲低促进了AD的增殖。