軸策誘導因子Netrin-1を標的にした新規髄芽細胞腫瘍治療法の開発

开发针对轴突诱导因子 Netrin-1 的新型髓母细胞瘤疗法

• 批准号: 15H06457
• 负责人: 中山 寛尚
• 金额: $ 1万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06457/
• 关键词: 軸索誘導因子; netrin-1; 髄芽腫; 血管新生

小児脳腫瘍である髄芽腫（medulloblastoma, 以下MBとする）は、小脳に発症する悪性腫瘍である。私はこれまでに、MB腫瘍細胞自身から遊離される軸索誘導因子netrin-1がMB細胞の浸潤能の促進に関わっていることを見出し、さらにMB腫瘍バイオマーカーとしての有用性を提案してきた(Cancer Res, 2014)。本研究では、netrin-1シグナルを阻害することによるMB腫瘍抑制効果を、MBモデル動物を用いて評価する。平成27年度はnetrin-1とそのレセプターの機能を阻害するため、netrin-1レセプター阻害剤（環状ペプチド）の開発を目指す。我々はまず、環状ペプチドをRaPID (random nonstandard peptides integrated discovery, Chem Biol., 2011)システムでスクリーニングするため、netrin-1蛋白質の精製を試みた。Netrin-1はビーズに固定化するためHis x 10 tagをC末端に付加したコンストラクトを作成した。このプラスミドを293T細胞に導入して、培養液中に分泌されたnetrin-1-His10蛋白質を回収しニッケルカラムを用いて精製した。ペプチドスクリーニングには高い精製度が必要なため、現在はイオン交換クロマトグラフィーを用いて精製を続けている。精製蛋白質の生理活性はnetrin-1レセプターであるneogeninを高発現した細胞を用いてERKシグナルを測定する予定である。neogenin発現細胞の作成はすでに完了している。次年度に予定しているMBモデルマウス(smo/smoマウス)はすでに購入し繁殖を開始しており、受精卵の保存が完了している。阻害ペプチドが完成次第、動物実験への移行が可能な状況である。

Small and medium-sized tumors, small and medium-sized tumors In contrast, MB tumor cells themselves are free from the presence of axonal-inducible factor netrin-1, which has been shown to promote MB cell infiltration (Cancer Res, 2014). In this study, we evaluated the effects of MB tumor inhibition on netrin-1 and its use in animals. In 2007, the development of netrin-1 and netrin-1 was directed. RaPID (random nonstandard peptides integrated discovery, Chem Biol., 2011) The purification of netrin-1 protein was tried. Netrin-1 Immobilization of His x 10 tag This protein was introduced into 293T cells and secreted into culture medium. It is necessary to improve the quality of the products. The physiological activity of the purified protein was determined by the method of netrin-1 and neogenin. Neogenin production cells are completed. In the next year, the MB is scheduled to be purchased and the reproduction is started, and the preservation of fertilized eggs is completed. Impeachment, animal behavior and migration are possible conditions.