タバコ煙刺激と歯周病原細菌によるヒト歯肉上皮細胞のmiRNA発現・機能解析

香烟烟雾刺激和牙周病原菌诱导的人牙龈上皮细胞miRNA表达及功能分析

• 批准号: 15H06631
• 负责人: 今村 健太郎
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06631/
• 关键词: miRNA; タバコ煙; Porphyromonas gingivalis; ヒト歯肉上皮細胞; 細胞遊走能

我々はこれまでタバコ煙抽出物（CSC）が細胞機能，とくに遊走能に対し低濃度で促進，高濃度で抑制と二相性の影響を与え，このようなCSC の作用はPorphyromonas gingivalis感染によって修飾されることを明らかにしてきた。この先行研究の結果を受け，さらに詳細なメカニズムを検討することを目的として，本年度は宿主細胞に対するCSCと P. gingivalis 感染によるエピジェネッティックな影響を検索した。遊走能の促進が認められた低濃度CSC10 μg/ml によるヒト歯肉上皮細胞のmiRNA 発現の変化をPCR arrayを用いて評価した。その結果を踏まえ，変化が著名に認められたmiRNAの中から，細胞遊走の促進と抑制への関与が示唆されているものを選択し，高濃度CSC250 μg/ml とP. gingivalis 感染を伴わせた条件を加えてRT-PCR を行った。PCR arrayの結果として，84個のmiRNAうち64個において1.5倍以上の上昇が認められた。さらにRT-PCRでは，遊走能の促進に関与しているmiR-125aの発現量をコントロールと比較したところ，低濃度CSC群で1.4倍，高濃度CSC＋P. gingivalis 群で1.7倍の発現上昇を示し，高濃度CSCでは60％程度の減少を認めた。また，抑制に関与が示唆されているmiR-301は高濃度CSC＋P. gingivalis 群において1.9倍の発現量を示した。以上の結果より，miR-125aは低濃度CSCによる細胞遊走能の抑制に関与しており，miR-301は高濃度CSCとP. gingivalis 感染による遊走能の抑制に関与していることが明らかとなった。今後は，これらのmiRNAがシグナル伝達経路（MAPkinase）関連タンパクに与える影響を解明し，宿主細胞の機能，特に細胞増殖能や遊走能の制御法の検討をする必要があると考えている。

我们先前已经表明，烟草烟提取物（CSC）促进细胞功能，尤其是在低浓度下以高浓度抑制和双相作用，并在高浓度下抑制和双相作用，并且这种CSC的作用通过牙龈卟啉单胞菌感染而改变。根据这项先前研究的结果，我们搜索了今年CSC和牙龈疟原虫感染对宿主细胞的表观遗传作用，目的是进一步详细的机制。使用PCR阵列评估了观察到的10μg/mL CSC的人牙龈上皮细胞中miRNA表达的变化，该细胞的变化被观察到了促进迁移能力的CSC。基于结果，在具有显着变化的miRNA中，选择参与促进和抑制细胞迁移的miRNA，并以250μg/ml的CSC进行了RT-PCR，并伴有牙龈疟原虫感染的条件。由于PCR阵列的结果，84个miRNA中有64个显示出1.5倍或以上。此外，当RT-PCR比较参与促进迁移能力的miR-125a的表达水平时，低浓度CSC组的表达水平高1.4倍，高浓度CSC +牙龈glo虫组的表达水平高1.7倍，高分辨率CSC中的表达水平高约1.7倍。此外，已建议参与抑制的miR-301在高浓度的CSC + P.牙龈疟原虫组中显示出1.9倍的表达水平。以上结果表明，miR-125a参与低浓度CSC抑制细胞迁移能力，而miR-301参与了高浓度的CSC和牙龈疟原虫感染来抑制细胞迁移能力。将来，我们认为有必要阐明这些miRNA对信号转导途径（MAPKINASE）相关蛋白的影响，并研究控制宿主细胞功能的方法，尤其是细胞增殖和迁移潜力。