切除標本からの門脈系exosome解析による大腸癌肝転移ハイリスク群選別法の発明

发明利用切除标本门静脉系统外泌体分析高危结直肠癌肝转移群体选择方法

• 批准号: 16H07055
• 负责人: 貞苅 良彦
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-08-26 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H07055/
• 关键词: exosome; 大腸癌肝転移; 門脈血; 早期診断; 門脈系血液中マーカー解析; DNA解析; タンパク解析

まず門脈系血清のサンプル採取を行った。平成28年4月から大腸癌手術症例の摘出検体の下腸間膜静脈から血清を採取している。現時点で計39症例から採取しており、うち6例（15%）はStage4症例である。さらに同門脈系血清からexosomeを、超遠心法、及び抽出キットを使用した方法で抽出し、抽出方法がexosome抽出量に影響を与えるかを調べた。大腸癌由来exosomeの表面マーカーといわれるCD9/CD147を測定し、門脈系exosomeに大腸癌由来exosomeが含まれていること、抽出方法はexosome抽出量に影響を与えないことを確認した。また手術前、手術後の末梢血採血も進めている。現在10症例から術前術後末梢血を採取しており、門脈血同様CD9/CD147を測定している途中である。サンプル採取に関しては、大腸癌症例は収集が容易であるが、コントロールとして健常群（憩室炎、虚血性腸炎など）の収集はやや遅れている。採取不能な場合、内視鏡的粘膜切除(EMR)後で癌遺残が全くない症例などを代用する予定である。Exosomeが抽出されている確認として、ナノ粒子トラッキング解析(Nanosight)、及び電子顕微鏡での小胞確認、ウエスタンブロッティング法でのExosomal Markerの確認を行った。各々良好な結果が得られている。現在、さらなるサンプル採取を継続している。exosome内のRNA/microRNA/タンパクを抽出する予定である。最終的にはインテグリンファミリーの解析を行う。将来的に肝転移を来しうる症例を識別し大腸癌肝転移ハイリスク群の早期診断のみならず、治療方針の決定・大腸癌の予後改善に飛躍的な進歩が期待できる。

The serum of the まず portal vein system is サ サ プ プ った taken in を lines った. In April 28, Heisei 28, a surgical case of <s:1> ら colorectal cancer was performed. The 検 body and the subintestinal membranous vein of the <s:1> were extracted. The を ら serum was taken from the を て る る る. At present, there are 39 cases of で. Youdaoplaceholder1 is taken as <s:1> てお てお, うち6 cases (15%), and で Stage4 cases である. さ ら に stuff venation serum か ら exosome を, loading, and vast び spare キ ッ ト を use し で drew し た method, method of extraction が に exosome spare quantity influence を and え る か を adjustable べ た. Colorectal origin exosome の surface マ ー カ ー と い わ れ る CD9 / CD147 を determination し, portal exosome に colorectal origin exosome が containing ま れ て い る こ と, method of extraction は に exosome spare quantity influence を and え な い こ と を confirm し た. Blood collection of peripheral blood before and after the また operation was carried out in めて る る る. Now 10 cases か ら preoperative を postoperative peripheral blood taken し て お り, portal blood with others CD9 / CD147 を determination し て い る way で あ る. サ ン プ ル take に masato し て は, colon cancer cases は 収 set が easy で あ る が, コ ン ト ロ ー ル と し て health do (diverticulitis, virtual hemorrhagic enteritis な ど) の 収 set は や や 遅 れ て い る. In cases where な is not feasible and endoscopic mucosal resection (EMR) is performed, で cancer residue が all くな な cases な <s:1> を を を are replaced by する to determine である. Exosome が spare さ れ て い る confirm と し て, ナ ノ particle ト ラ ッ キ ン グ parsing (Nanosight), and び electronic 顕 micromirror で の vesicular confirmation, ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ method で の Exosomal Marker の confirm line を っ た. Each 々 good な result が られて られて る る. Now, さらなるサ プ プ る take を継続 て る る る. exosome 's intracytogenic RNA/microRNA/タ パ パ を を を extraction する assigned である. The final に, に, テグリ, テグリ, ファ, ファ, リ, <s:1> resolves the を line う. Future に liver planning to move を し う る cases を recognition し colorectal liver planning move ハ イ リ ス ク group of early diagnosis の の み な ら ず, treatment guidelines の decided after colorectal cancer の to improve に leap な into step が expect で き る.