消化管癌のRNAにおけるN6-メチルアデノシン(m6A)による癌制御メカニズム

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数種類の食道癌、胃癌、大腸癌細胞株を用いて、細胞培養後、RNAを抽出し、cDNAを作成してMETTL3のプライマーでqRT-PCRを行った。同様の解析を非癌細胞でも行い、消化管癌細胞株におけるMETTL3のmRNAの発現レベルを確認し、非癌細胞における発現レベルとの比較を行った。結果、細胞株においてややばらつきはあるものの、食道癌、及び大腸癌細胞株において、大部分が非癌細胞よりmRNAの発現レベルが高い傾向がみられた。また、上記の各種細胞株を用いてウェスタンブロッティングを行い、METTL3のタンパク質レベルについても解析した結果、一部の食道癌細胞株においてMETTL3が高発現していた。現在、METTL3、FTO、ALKBH5のsiRNAを準備中であり、食道癌、胃癌、大腸癌細胞株を用いたノックダウン実験の計画を立てている。また、METTL3、FTO、ALKBH5のノックダウン時の発現レベルの変化をみる代表的な癌遺伝子/癌抑制遺伝子/癌幹細胞マーカー遺伝子についても、標的となり得る候補遺伝子の検討を行っている。尚、人事異動により平成30年1月から研究施設を移ることとなり、異動先では同様の実験は行われておらず、すぐには実験を開始出来ない状況であった。新たな施設で実験を再開するにあたり、器具、試薬、機器などの環境を整えるため、必要物品を一から購入し、改めて実験が出来るよう調整を行っている所である。