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消化管癌のRNAにおけるN6-メチルアデノシン(m6A)による癌制御メカニズム

胃肠道癌RNA中N6-甲基腺苷（m6A）的控癌机制

基本信息

批准号：
17H06943
负责人：
工藤健介
金额：
$ 1.75万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-08-25 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H06943/
关键词：
METTL3 N6-メチルアデノシン食道癌胃癌大腸癌 m6A Mettl3

项目摘要

数種類の食道癌、胃癌、大腸癌細胞株を用いて、細胞培養後、RNAを抽出し、cDNAを作成してMETTL3のプライマーでqRT-PCRを行った。同様の解析を非癌細胞でも行い、消化管癌細胞株におけるMETTL3のmRNAの発現レベルを確認し、非癌細胞における発現レベルとの比較を行った。結果、細胞株においてややばらつきはあるものの、食道癌、及び大腸癌細胞株において、大部分が非癌細胞よりmRNAの発現レベルが高い傾向がみられた。また、上記の各種細胞株を用いてウェスタンブロッティングを行い、METTL3のタンパク質レベルについても解析した結果、一部の食道癌細胞株においてMETTL3が高発現していた。現在、METTL3、FTO、ALKBH5のsiRNAを準備中であり、食道癌、胃癌、大腸癌細胞株を用いたノックダウン実験の計画を立てている。また、METTL3、FTO、ALKBH5のノックダウン時の発現レベルの変化をみる代表的な癌遺伝子/癌抑制遺伝子/癌幹細胞マーカー遺伝子についても、標的となり得る候補遺伝子の検討を行っている。尚、人事異動により平成30年1月から研究施設を移ることとなり、異動先では同様の実験は行われておらず、すぐには実験を開始出来ない状況であった。新たな施設で実験を再開するにあたり、器具、試薬、機器などの環境を整えるため、必要物品を一から購入し、改めて実験が出来るよう調整を行っている所である。

Several types of esophageal cancer, gastric cancer, colorectal cancer cell lines were used, cell culture, RNA extraction, cDNA preparation, METTL3 and qRT-PCR were performed. Analysis of METTL3 mRNA expression in non-cancer cells, digestive tract cancer cell lines and comparison of METTL3 mRNA expression in non-cancer cells The results showed that most of the non-cancer cell lines had a high tendency to express mRNA in esophageal cancer and colorectal cancer cell lines. METTL3 was found to be highly detectable in some esophageal cancer cell lines. Now, METTL3, FTO, ALKBH5 siRNA preparation, esophageal cancer, gastric cancer, colorectal cancer cell lines to use in the implementation of the program to establish METTL3, FTO, ALKBH5, and the candidate genes of the cancer gene/cancer suppressor gene/cancer stem cell represented by METTL3, FTO, and ALKBH5 are detected. In January 2010, the research facility was moved, and the personnel change was initiated. New equipment, equipment, machinery, environment, necessary items, purchase, modification, adjustment, etc.