オミックス解析を基盤とする遺伝子治療用ヘルペスウイルスベクターの合理的設計

基于组学分析合理设计基因治疗疱疹病毒载体

• 批准号: 17H07146
• 负责人: 塩澤 裕介
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-08-25 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H07146/
• 关键词: 遺伝子治療; 単純ヘルペスウイルスベクター; ウイルスベクター; トランスレーショナルリサーチ; 発現制御

本研究は、単純ヘルペスウイルス（HSV）ベクターを用いて治療遺伝子を標的細胞に安全に送達する技術の確立を目指している。HSVベクターの医療実装にあたっては、細胞毒性の低減と治療遺伝子の持続的発現の二つを両立可能なHSVゲノム改変法を明らかにする必要がある。そのため、本年度は以下のとおり研究を進めた。１）HSVゲノムの遺伝子改変：従来、われわれはHSVゲノムから５つの毒性遺伝子の発現を欠損させることでベクターを無毒化していた。しかし、これらの遺伝子の近傍にはインスレーター領域など、遺伝子発現制御に重要な配列が複数存在する。これらのうち、どれを残し、どれを欠失させるのが最適かは明らかではない。そこで、こうした遺伝子発現制御配列のどれを欠失させるかについて複数のパターンの遺伝子改変を施し、その違いを調べる準備を行った。２）本研究では、次世代シーケンサーを用いたトランスクリプトームの網羅的解析により、HSVゲノム上で転写活性が保たれるゲノム領域を明らかにすることを目指している。その準備として、本年度は次世代シーケンサーを用いた実験系を確立するとともに、解析環境を整備した。また、in vitroでの検討に用いるラットの脊髄後根神経節の培養系を確立した。３）様々なHSV株のゲノム解析：HSVにはKOS株やHF株など複数の亜株が存在し、細胞毒性や増殖能に違いがある。こうした違いはゲノム配列の違いに起因すると考えられるが、それを具体的に明らかにすることはベクター開発上も有用である。そこで本年度はKOS株、HF株、vHG株という３つの亜株からウイルスDNAをとり、シーケンスライブラリを調製した。今後はこれらのサンプルのシーケンス解析を行い、塩基配列上の違いを明らかにする予定である。本研究は、平成３０年度より研究種目・若手研究のご支援を賜り、継続させていただくこととなった。

In this study, the purpose of this study is to establish the technology of pure HSV (HSV) using HSV to treat target cells safely. HSV medical treatment equipment, reduction of cytotoxicity, and maintenance of treatment remains The reason for the change is that it is possible to change the method of HSV and it is necessary to change it.そのため、This year's following のとおり research is going on. 1)HSVゲノムの伝子椉：従来、われわれはHSVゲノムから５つのtoxicity is left in the rind, and the damage is now gone. It is now non-toxic.しかし, これらの伝子の near にはインスレーター domain など, 伝子発出篺にimportantな配arrayが plural existenceする.これらのうち, どれを半し, どれを owed to lose させるのがthe most suitable かは明らかではない.そこで、こうした缝子発出入経行のどれを无码させるかについてPlural form of のパターンの伝子change変をShiし, そのviolation of いを Adjustment of を行った. 2) This study analyzes the use of next-generation シーケンサーを いたトランスクリプトームのNET snares. , HSV ゲノム上で転WRITE active が宝たれるゲノムfield を明らかにすることを Eye finger している. This year, we are preparing for the next-generation system, establishing the next-generation system, and refining the analysis environment. The culture system of the いるラットのridge and back root god is established in vitro. ３) Analysis of HSV strain HSV strain: HSV strain KOS strain, HF strain, plural strains, existence, cytotoxicity, proliferation ability, and violation.こうしたviolationいはゲノムmatching arrangementのviolationいにcauseすると考えられるが、それをspecific に明らかにすることはベクター开発上も用である. This year's KOS strain, HF strain, vHG strain, という３つの亜 strain, からウイルスDNA をとり, シーケンスライブラリを modulated した. From now on, the analysis and analysis of the はこれらのサンプルのシーケンス will be done in advance. This research is based on the 2006 research projects of the year 2008. Wakate Research Support Project, and the 継続させていただくこととなった.