アデノ随伴ウイルスベクターの特異的ターゲティングによる新規遺伝子治療法の開発

通过腺相关病毒载体的特异性靶向开发新的基因治疗方法

• 批准号: 21K15875
• 负责人: 塩澤 裕介
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15875/
• 关键词: 遺伝子治療; ウイルスベクター; ターゲッティング

本研究では、抗体にアダプターを付与し、これを介して抗体とAAVカプシドを間接的に結合させるシステムの開発を目指している。アダプターとして、１）ヘテロ二量体化するよう設計されたcoiled-coilドメイン、と２）分子A（知財申請中のため詳細を伏せている）の二つを試した。まず、高親和性の一本鎖抗体（scFv）が知られているHER2を表面抗原のモデルとし、以下の通りベクターシステムの構築を進めた。１）AAVカプシドへの変異導入：AAVベクターによる非標的細胞への遺伝子導入を防ぐため、カプシドタンパク質に変異を導入し、細胞表面の受容体と結合できないようにした。２）coiled-coilドメインをアダプターとするベクターシステムの構築：互いに特異的に会合するよう設計されたcoiled-coilドメインのペアを用いることとし、一方のモノマーをHER2に対するscFvに、もう一方をカプシドタンパク質であるVP2に挿入した。改変したVP2を含むAAVベクターの作製を試みたが、改変VP2はベクター粒子にうまく組み込まれなかった。VP2の改変により分子構造が大きく変化し、ベクター粒子に組み込まれなくなったと考えられた。３）分子Aをアダプターとするベクターシステムの構築：分子Aが実際にAAVカプシドと結合することをプルダウンアッセイで確認した後、HER2に対するscFvとつなげ、分子A付きscFvを作製した。４）HER2を強発現する乳がん細胞株SK-BR-3に、分子A付きscFvとAAVベクターを投与し、遺伝子導入効率を調べた。分子A付きscFvを加えなかったときはほとんど遺伝子導入が見られなかったのに対して、これを加えたときは野生型のカプシドを持つAAVと同程度の遺伝子導入効率が得られた。これにより、AAVベクターの標的指向性を改変するための原理を確立できたと考えられた。

This study is aimed at the development of an indirect antibody binding system. 2) Molecular A (detailed information in the application) and 2) molecular A (detailed information in the application) A novel, high-affinity, self-locking antibody (scFv) has been developed to detect HER2 surface antigens. 1) AAV gene transfer: AAV gene transfer into non-target cells, AAV gene transfer into cells, AAV 2) The structure of coiled-coil interface: the unique combination of coiled-coil interface and coiled-coil interface; the scFv of HER2; the scFv of HER2; and the scFv of HER2. Change VP2 to include AAV, change VP, change VP, change VP The molecular structure of VP2 is changed greatly, and the particle structure is changed greatly. 3) Construction of molecule A scFv system: molecule A scFv system was constructed after molecule A was confirmed to bind to molecule A. 4) HER2 gene expression in breast cancer cell line SK-BR-3, molecular A/scFv and AAV gene expression in breast cancer cell line SK-BR-3, gene expression in breast cancer cell line SK-BR-3 and AAV gene expression in breast cancer cell line SK-BR-3. The gene introduction rate of A/V scFv was higher than that of wild type scFv. The principle of changing the directivity of the target is established.

项目成果

汎用的かつ標的臓器特異的な新規遺伝子治療法の開発

通用和靶器官特异性新型基因治疗方法的开发

• 发表时间: 2022
• 作者: Hisato Suzuki;Masatoshi Nozaki;Hiroshi Yoshihashi;Kazuo Imagawa;Daigo Kajikawa;Mamiko Yamada;Yu Yamaguchi;Naoya Morisada;Mayuko Eguchi;Shoko Ohashi;Shinsuke Ninomiya;Toshiyuki Seto;Tomoharu Tokutomi;Mariko Hida;Katsuaki Toyoshima;Kenjiro Ko;山田茉未子;山田茉未子;大西聡;大西聡;Sαtoshi Ohnishi;大西聡;大西聡;大西聡;塩澤裕介
• 通讯作者: 塩澤裕介