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マイクロ化学チップを用いた単一細胞内単一DNA分子分析法の開発

开发使用微量化学芯片分析单细胞中单个 DNA 分子的方法

基本信息

批准号：
20245016
负责人：
北森武彦
金额：
$ 23.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20245016/
关键词：
マイクロ化学チップ単一DNA RCA

项目摘要

病原性とそうでない細菌の検出、また、医療診断、たとえばがん診断、敗血症診断などでは、単に単一DNAの分析のみならず、単一細胞内のDNAをin situ解析する高度な要求がある。現状は、単一細胞を扱うことが困難なため、複数の細胞を使っている上、長時間にわたる煩雑な酵素反応等の操作で行っているが、診断法として満足な方法は未だに開発されていない。一方、細胞操作をマイクロ化学チップに集積化することで、実験のプロセス効率化や単一細胞分析が可能になる。そこで、申請者は、マイクロ化学チップの持つフロー反応システムと特異的DNAプローブとDNA増幅反応(Padlock/RCA法)を併せて、従来にない全く新しい、高速、高精度に単一細胞内の単一DNA分子を検出するための革新的分析法を創出することを研究目的とした。昨年度は白血球の固定化からDNAの検出までのすべての化学プロセスをマイクロ化学チップに集積化することに成功して、1万分子程度の検出性能を実証した。しかし、この手法ではDNAが捕捉される領域が5mm程度と長く、またビーズ上での検出で光学測定が困難であり、検出性能向上に限界があった。そこで、今年度はマイクロ流路内壁のガラス表面を利用してRCAを行うためのDNA部分的固定化法を開発した。光リンカーを独自に開発して、光照射部(数100μm)のみにDNAを固定化することに成功した。

The pathogens were isolated from bacteria, isolated from pathogens, isolated from the doctor, cut off from the doctor, cut off from the blood, isolated from the blood, analyzed by DNA, in situ and highly demanding. The operation of monitoring, monitoring On the one hand, the operation of the cell, the chemical method, the concentration of the cell, the rate of the cell analysis and the possibility of cell analysis. In this paper, we use the DNA method (Padlock/RCA method) to improve the accuracy, high speed, high precision, and so on. Last year, white blood cells were immobilized, DNA was immobilized, and the performance was measured at the molecular level of 10, 000 molecular weight. The method of DNA captures the field of 5mm, the level of optical measurement, and the performance of the upper limit. This year, the surface of the inner wall of the flow path will be opened by the method of immobilization of the DNA part of the RCA system. The light irradiation section (100 μ m) was used to immobilize the DNA and the light was successfully used.