マイクロチップを用いた高速高感度な内分泌拡散物質および関連物質の分析

使用微芯片对内分泌扩散剂和相关物质进行高速、高灵敏度分析

• 批准号: 13027219
• 负责人: 北森 武彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027219/
• 关键词: マイクロチップ; 環境ホルモン; エストラジオール; イムノアッセイ; 熱レンズ顕微鏡; 集積化学実験室; 内分泌撹乱物質; ELISA

マイクロチップを用いた高速高感度な内分泌撹乱物質および関連化合物の簡便迅速な分析システムを開発することを目標として、マイクロチップを用いたアッセイシステムの開発を行った。モデルケースとして小型海産巻き貝一個体中に微量含まれる性ホルモン17β-estradiolの定量を目標にした。数cm角のパイレックスガラス基板中に、深さ100μm、幅250μmで、中央部のみビーズをせき止めるために深さを10μmにしたマイクロチャネルを作製した。このチップに反応固相として直径15-50μm程度のポリスチレンビーズを導入し、ここに試料および各種試薬溶液を添加し、チップ内でそのまま抗原抗体反応および洗浄操作、酵素反応などを行った。生じた酵素反応生成物の検出には高感度な分析法である熱レンズ顕微鏡を用いた。作製したチップにあらかじめ抗17β-estradiol抗体を吸着させたビーズを導入した後、シリンジポンプを用いて17β-estradiolを含む試料と一定量のペルオキシダーゼ標識した17β-estradiolを混合した溶液を流し入れ、競合的に抗原抗体反応させた。未反応物を洗浄後、酵素基質を導入して酵素反応させ、そこで生成する発色物質を下流部で検出することにより定量を試みた。その結果、再現性はやや悪いものの、1-1,000pg/mLの比較的低濃度の濃度範囲で検量線を作成することが出来た。アッセイに必要な試料体積が極めて少量であることとあわせると、小型の巻き貝一個体からの抽出液から測定するのに充分な感度を有していることが明らかとなった。開発した方法では半日以上かかっていた分析を30分程度で終えることができ、分析時間の短縮も実現した。本システムは生体中の微量な環境ホルモン及び関連化合物の迅速簡便な分析手法として極めて有効な手法となることが期待できる。

マ イ ク ロ チ ッ プ を with い た high-speed Gao Gan degrees な endocrine 撹 disorderly substances お よ び masato even compound の is simple rapid な analysis シ ス テ ム を open 発 す る こ と を target と し て, マ イ ク ロ チ ッ プ を with い た ア ッ セ イ シ ス テ ム の open 発 を line っ た. モ デ ル ケ ー ス と し て small seafood 巻 き に trace in bei an individual contains ま れ る sex ホ ル モ ン 17 beta estradiol の を quantitative target に し た. Several cm Angle の パ イ レ ッ ク ス ガ ラ ス に in substrate, m deep さ 100 mu, 250 mu m で, central department の み ビ ー ズ を せ き check め る た め に deep さ を 10 microns に し た マ イ ク ロ チ ャ ネ ル を cropping し た. こ の チ ッ プ に anti 応 solid-phase と し て degree of 15 to 50 microns diameter の ポ リ ス チ レ ン ビ ー ズ を import し, こ こ に sample お よ び を add し, try various 薬 solution チ ッ プ within で そ の ま ま antigen antibody against 応 お よ び operation, enzyme at the 応 な ど を line っ た. Raw じ た enzyme reverse 応 products の 検 out に は Gao Gan degrees な analysis で あ る hot レ ン ズ 顕 micromirror を with い た. Cropping し た チ ッ プ に あ ら か じ め resistance to 17 beta estradiol antibody を sorption さ せ た ビ ー ズ を import し た, シ リ ン ジ ポ ン プ を with い て 17 beta estradiol を containing む sample と amount の ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ logo し た 17 beta estradiol を mixed し し を た solution flow into れ, competition Youdaoplaceholder0 antigen-antibody reverse 応させた. Not against 応 after incorporated を, enzyme substrate を import し て enzyme reverse 応 さ せ, そ こ で generated す る 発 colour material を dirty で 検 out す る こ と に よ り quantitative を try み た. そ の results, reproducibility は や や 悪 い も の の, 1-1000 pg/mL の is concentration of low concentration の van 囲 で 検 quantity line を made す る こ と が た. ア ッ セ イ に な necessary sample volume が very め て small で あ る こ と と あ わ せ る と, small の 巻 き bei an individual か ら の extract か ら determination す る の に full を な sensitivity have し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. More than open 発 し た method で は semidiurnal か か っ て い た analysis を 30 degree で eventually え る こ と が で き, short analysis time の shrinkage も be presently し た. This シ ス テ ム は の trace な environment in living body ホ ル モ ン and び masato simple compounds の rapidly な analysis technique と し て extremely め て have sharper な gimmick と な る こ と が expect で き る.

项目成果

佐藤 記一: "Microchip-based immunoassay system with branching multichannels for simultaneous determination of interferon"Electrophoresis. 23・5. (2002)

Kiichi Sato：“用于同时测定干扰素的基于微芯片的免疫测定系统”23・5。