イモリ切断損傷脊髄の完全再生を担う再生細胞の分化多能性と組織再構築能の検証

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本研究課題の目的は、イモリ脊髄損傷後にその再生を担う細胞(以下、再生細胞と呼ぶ)の分離培養法を開発することと、再生細胞の分化多能性の維持や組織再構築能の発揮に係る細胞内シグナル経路や接着分子を明らかにすることである。当該年度は、まず前年度の成果についての論文を執筆し、投稿・公表した。当該論文の内容は、イベリアトゲイモリの中枢神経系組織から神経幹細胞を回収し培養する方法を確立した、というものである。具体的には、マウス等の哺乳類における神経幹細胞の一般的な培養法（ニューロスフィア法）をアレンジした手法を用いることで、イモリの脳と脊髄に由来する細胞からもニューロスフィア様の細胞塊が形成されることを示した。さらに、その細胞塊を構成する細胞が神経幹細胞のマーカータンパク質を発現することと、ニューロンやグリア細胞へと分化することを明らかにし、神経幹細胞としての性質を備えていることを示した。現在、幹細胞性をより厳密に証明するために、得られた細胞塊（ニューロスフィア）の継代培養を行い、繰り返し継代したあとでも未分化性と分化多能性が維持されるか検証中である。加えて、当初の計画を変更し、脊髄を再生できるイモリと再生できないマウスの神経幹細胞の遺伝子発現プロファイルの比較解析を行うこととした。これにより、イモリ特異的に高発現している遺伝子や活性化しているシグナル経路を見つけ出し、さらに再生能力との関連を実験的に示すことが狙いである。現在までに、上記方法で培養したイモリ由来のニューロスフィアと、マウス由来のニューロスフィアからtotal RNAを抽出し、RNA-seqを実施した。現在、シークエンス結果のデータ解析を実施している最中である。