線維性異形成症における感受性遺伝子の探索とクリスパー技術を用いた骨分化機構の解明

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当初の予定では、CRISPR/Cas9 技術を用いて、hBMSCs のCecr2 遺伝子をノックアウトした細胞株（Cecr2 KO hBMSCs）を樹立。Cecr2 のWTとCecr 2 KO hBMSCs 細胞を用いて、骨分化誘導を行い、骨代謝マーカー (アルカリフォスファターゼ (ALP)、Bone Sialo protein (BSP) など) の発現レベルについて現有の定量PCRおよび定量Western blot解析を行い、さらに、ALP活性およびCa量の定量評価及びアリザリンレッド染色法を用いた石灰化能の検討を行い、さらに骨分化誘導後のCecr2 WTとKO hBMSCs 細胞を用いて、RNA-seq によって骨分化に関連する遺伝子の発現変動を網羅的な解析、また同条件下で、Cecr2 WTとKO hBMSCs のクロマチン免疫沈降シークエンス（ChIP-seq）を行い、その結果から、アセチル化された骨分化関連遺伝子のプロモーターあるいはエンハンサー領域において、どの部位に Cecr2 が結合しているか解析し、Cecr2 により制御される骨分化関連遺伝子の同定及び、Cecr2 KOがアセチル化領域全体の増減に影響するかも解析する予定であったが、産休育休取得のため、ノックアウト細胞株の作成まで行っている状況である。