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生細胞上の内在性受容体膜蛋白質への選択的合成プローブ導入技術の開発と応用

活细胞内源性受体膜蛋白选择性合成探针导入技术的开发及应用

基本信息

批准号：
22850006
负责人：
築地真也
金额：
$ 2万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

現代の蛋白質科学では、生きた細胞や生体複雑系における蛋白質の機能・動態・相互作用をin situで解析することが大きな課題となっている。このような研究において不可欠となるのが「蛋白質の選択的標識技術」である。現在、蛍光蛋白質を対象蛋白質に融合して用いるアプローチが主流となっているが、この手法では、あくまでも細胞内に人工的に発現させた改変型蛋白質を観察しており、細胞内にもともと存在する真の対象蛋白質を見ているわけではない。細胞内在性の蛋白質のin situ機能解析に使用可能な蛋白質標識法は、今なお確立されていない。本研究では、研究代表者が最近開発した「リガンド指向型トシル(LDT)化学」をもとに、この未開拓領域に挑戦する。LDT化学は、細胞内に内在する標的蛋白質を選択的かっ部位特異的に、そして機能を損なうことなく化学修飾することのできる現在唯一の手法である。本研究では、GPCRのブラジキニンB2受容体(B2R)とGPIアンカー型蛋白質の葉酸受容体(FR)を標的蛋白質として定め、生細胞上のこれらの内在性受容体膜蛋白質の蛍光修飾およびその局在動態のリアルタイムイメージングに取り組む。本年度はまず、両蛋白質に対する選択的LDTラベル化剤の合成から着手した。B2Rに対してはアンタゴニストペプチドを、FRに対しては葉酸をリガンドとし、これらとビオチンプローブをトシル基(フェニルスルホン酸エステル)によって連結したラベル化剤を合成した。更に、得られたラベル化剤を用い、PC12およびKB細胞上の内在性B2RおよびFRのラベル化を検討した。これまでに、B2Rのラベル化は上手くいっていないが、FRについては低収率ながらもラベル化が進行していることが確認された。今後、ラベル化剤の分子構造(特にスペーサー長)の最適化を行い、蛍光修飾とイメージング実験へと進む予定である。

The biological replication of proteins, proteins, In the field of research, it is important to make sure that you need to know the identity technology of protein selection. At present, light protein protein fusion is used to detect the presence of real protein, which is the main stream of protein fusion. The intracellular protein in situ machine can be used to analyze the possible protein assay, and now make sure that the protein is detected. In this study, the representative of the research has recently opened a discussion on the direction-oriented medicine (LDT) chemistry in the field of research and development. The LDT chemistry, the protein in the intracellular protein, the special location of the protein in the cell, the specific protein in the cell, the enzyme in the cell, the protein in the cell. In this study, GPCR receptor (B2R), GPI receptor (B2R), GPI receptor (B2R), acid receptor (FR) protein, endogenous receptor membrane protein, internal receptor membrane protein, biodegradable protein, and so on. This year, the LDT that you selected for this year's protein and protein synthesis will begin to work. B2R, FR, acid, acid and acid. For more information, we need to know that there is an internal B2R receptor in the cells of PC12 KB cells, and that there is no change in the cells of FR cells. You need to make sure that you need to improve the performance of your computer, B2R, B2R, and FR. You need to make sure that you are in good health. In the future, we will use the most advanced molecular technology to improve the performance of the industry and improve the performance of the system.