PSD-95パルミトイル化酵素DHHC2によるシナプス形成機構の解明

本研究の目的はポストシナプス膜近傍で機能するPSD-95パルミトイル化酵素、DHHC2に焦点をあて、その活性がどのような情報伝達機構により制御され、シナプス形成に関与しているか明らかにすることを目的としていた。研究実施計画としては、まず、DHHC2の活性制御因子の同定を独自に開発したタンデムタグ融合膜蛋白質を精製するシステムを応用し、ラット脳画分から免疫沈降法を用いて探索した。質量分析法の結果、数種類のDHHC2の結合蛋白質を同定し、機能解析をはじめていた。また、細胞生物学的手法を用いてDHHC2の局在の制御機構を検討するために、細胞表面に発現するようなDHHC2のコンストラクトを作製すると、DHHC2が細胞表面で局在することが明らかとなり、パルミトイル化酵素が細胞膜表面に局在することを初めて観察し、この細胞表面に発現したDHHC2が神経活動に依存して変化しうるか解析を進めた。上記の実験により、パルミトイル化脂質修飾酵素群の一つDHHC2が神経活動に依存的にどのようにシナプス形成に関与するかアプローチし、論文投稿まで行ったが、一身上の都合により、職を辞したため、研究の中止を申請し承認後、未使用の補助金を返還することとなった。

本研究の目的はポストシナプス膜近傍で機能するPSD-95パルミトイル化酵素、DHHC2に焦点をあて、その活性がどのような情報伝達機構により制御され、シナプス形成に関与しているか明らかにすることを目的としていた。研究実施計画としては、まず、DHHC2の活性制御因子の同定を独自に開発したタンデムタグ融合膜蛋白質を精製するシステムを応用し、ラット脳画分から免疫沈降法を用いて探索した。質量分析法の結果、数種類のDHHC2の結合蛋白質を同定し、機能解析をはじめていた。また、細胞生物学的手法を用いてDHHC2の局在の制御機構を検討するために、細胞表面に発現するようなDHHC2のコンストラクトを作製すると、DHHC2が細胞表面で局在することが明らかとなり、パルミトイル化酵素が細胞膜表面に局在することを初めて観察し、この細胞表面に発現したDHHC2が神経活動に依存して変化しうるか解析を進めた。上記の実験により、パルミトイル化脂質修飾酵素群の一つDHHC2が神経活動に依存的にどのようにシナプス形成に関与するかアプローチし、論文投稿まで行ったが、一身上の都合により、職を辞したため、研究の中止を申請し承認後、未使用の補助金を返還することとなった。