膵液糖タンパク質GP2のN型糖鎖と細菌レクチンFimHとの構造-親和性相関

胰液糖蛋白GP2 N-聚糖与细菌凝集素FimH之间的结构亲和关系

• 批准号: 22K20563
• 负责人: 西尾 俊亮
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Fukushima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20563/
• 关键词: 腸内細菌; GP2; FimH; バイレイヤー干渉法; 腸上皮細胞; ハイマンノース型糖鎖; レクチン

腸管は、私達が摂取した食べ物や侵入してきたウイルスや病原菌、さらに約100兆個にもなる腸内細菌に常に曝されている。多数の腸内細菌が生息している大腸は、厚い2層のムチン層による粘膜バリアをもち、腸管の恒常性を維持している。しかし、栄養不良などによる粘膜バリアの菲薄化は、腸内細菌の腸上皮細胞表面への定着を引き起こし、炎症性腸疾患の原因となりうる。GP2は、大腸が持つ炎症を抑制的に制御する仕組みの一つである。GP2は膵臓で合成される糖タンパク質で、腸管管腔へ移行したのち腸内細菌の線毛タンパク質FimHに結合し定着を阻害する。本研究では、腸管管腔における細菌認識機構について、GP2とFimHとの結合におけるタンパク質および糖鎖レベルでの構造活性相関を明らかにする。研究計画初年度となる今年度は、マウスGP2のFimH結合ドメイン（D10Cドメイン）を哺乳類細胞で発現・精製するためのコンストラクトを構築した。発現コンストラクトをHEK293T細胞に導入し、培養上清への分泌を確認した。さらに、N結合型糖鎖付加部位に変異を導入したコンストラクトを作製し、同様に発現・分泌を確認した。分泌した組換えGP2タンパク質を部分精製し、糖鎖切断酵素による糖鎖構造の解析を行った。その結果、組換えGP2にはFimHが認識すると予想される構造の糖鎖がほとんどないことが明らかになった。また、大腸菌FimHのGP2結合レクチンドメインを発現するためのコンストラクトを構築し、大腸菌への形質転換後、ペリプラズムへの分泌発現を確認した。組換えFimHタンパク質を部分精製し、バイレイヤー干渉法（BLI）による糖タンパク質との相互作用解析系を立ち上げた。

In the tube and in private, food products were collected and invaded into the pathogens, and about 100 trillion bacteria were frequently exposed. Most of the bacteria in the bacteria are sensitive to the disease, the thickness of the mucous membrane and the constancy of the mucous membrane are very common. The causes of inflammatory diseases, inflammatory diseases, and inflammatory diseases were determined by the thin film of mucous membrane, the surface of epithelial cells and inflammatory diseases. GP2 and Dazhi hold on to the prevention and control of inflammation. GP2 was used to synthesize sugar, transfer the lumen, transfer bacteria, hair and FimH to determine the blockage. In this study, the tube and lumen were tested, the bacteria were tested, and the GP2 FimH was used to determine the activity of the system. At the beginning of the research project, this year, this year's GP2 FimH combined with the mammalian cells of the D10C laboratory (D10C laboratory) showed that there was a high level of improvement in mammalian cells. It was found that the supernatant was secreted by the supernatant of HEK293T cells. The parts of the combination of sugar and N-type sugar were added to the diet, and the secretion was confirmed by the same concentration. The secretion of GP2 was used to determine the concentration of some seminal fluid, glucose cut-off enzyme, glucose production and analysis. The results and results show that you would like to GP2 the FimH information and make sure that you want to make sure that you are aware of the situation. The combination of FimH and GP2 showed that there was no significant difference between the two groups, and the secretion was confirmed by the secretion of bacteria. The analysis of the interaction is based on the analysis of the interaction between FimH and glucose. The results show that the analysis of the interaction is based on the method of BLI.