単為発生胚を用いた成長期卵母細胞ゲノムにおける初期胚発生能獲得時期の同定

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本年度はマウス非成長期卵母細胞(non-growing: ng)単為発生胚(ng/ng)の8細胞期での発生停止原因を解明することを目的とし、実験を行った。ng卵母細胞は1~2日齢の雌マウス卵巣から採取し、GV期卵母細胞および排卵卵子は成熟雌マウスから採取した。これら卵母細胞を用いて、GV期-MII期における連続核移植、続いて、塩化ストロンチウムおよびサイトカラシンBによる単為発生活性化により、ng/ng単為発生胚を作製した。初めにng/ng単為発生胚における初期胚発生能の詳細を観察した。その結果、活性化24時間後における2細胞期までの発生に問題はなかったが、48時間後以降に4細胞期を超えて発生した胚は約20%であり、そのほとんどが2細胞期で発生を停止した。そこで、ng/ng単為発生胚における胚性遺伝子活性(Zygotic Gene Activation: ZGA)を、1細胞期(Minor ZGA)および2細胞期(Major ZGA)にて、5-Ethynil Uridine (EU)を用いて検出し、染色後の相対蛍光強度を、成長が完了した卵母細胞単為発生胚(fully-grown: fg, fg/fg)と比較した。結果として、1細胞期(Minor ZGA)および2細胞期(Major ZGA)におけるEUの相対蛍光強度は、両者において有意な差は認められなかった。しかし、2細胞期におけるクロマチン構成を観察したところ、約40%のng/ng単為発生胚において核小体周囲へのクロマチンの凝縮の異常が観察された。これらの結果から、ng/ng単為発生胚の初期胚発生停止の要因として、2細胞期におけるクロマチンの凝縮不全が示唆された。