Development of a highly sensitive simple detection method for SARS-CoV-2 to achieve highly accurate diagnosis and elucidation of environmental dynamics

开发针对 SARS-CoV-2 的高灵敏度简单检测方法，以实现环境动态的高精度诊断和阐明

• 批准号: 21H03180
• 负责人: 山崎 渉
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03180/
• 关键词: 新型コロナウイルス; 高精度診断; 環境動態; 真牡蠣

新型コロナウイルス特異的なポリクローナル抗体（市販品3種類）を用いて、PBS（リン酸緩衝液）に添加した新型コロナウイルス（加熱処理済の非感染性株をATCCから購入して使用）の簡易高感度な濃縮検出法の開発を試行した。その結果、抗体Aが100倍以上の濃縮効果が得られることを確認した。次に、健康人の唾液やうがい液に同ウイルスを添加し、同様に簡易高感度な濃縮検出を試行した。しかし、唾液成分が反応を阻害するためか、PBSとは異なり、濃縮効果は得られなかった。対策として、唾液成分を溶解する効果が報告されている複数の物質を感作させる前処理工程を加えたうえで、上述の検出法の改良を図った。しかしながら、濃縮効果の改善は認められず、何らかの工程の改善が必要であることが分かった。異なる原理に基づく既存の濃縮法を改良したうえで、水環境中に存在する新型コロナウイルスウイルス（主に下水に由来）を生物濃縮している可能性がある食品Aからの濃縮検査法の開発を試みた。添加試験の結果、少なくとも10-100倍以上の濃縮効果が得られることを確認した。京都市内のスーパーマーケットなどで食品Aを購入し検査を行った結果、120サンプルすべてが新型コロナウイルス陰性であることを確認した。すべてのサンプルには内部陽性対照としてPEDV（豚コロナウイルス）を添加し、問題なく検出できることを確認した。食品Aに最適化した新型コロナウイルスの濃縮検出法の開発に成功するとともに、食品Aに対する新型コロナウイルスのリスク評価に必要なデータを順調に収集することができた。

The development of a simple high sensitivity concentration method for the preparation of novel C-reactive antibodies (3 types of commercially available products) was tested by adding PBS (acid buffer solution) to the new C-reactive antibodies (heat-treated non-infectious strains purchased from ATCC). The results were confirmed by A concentration of 100-fold or more for Antibody A. In addition, healthy people's saliva can be added to the liquid, and the simple high-sensitivity concentrated liquid can be tested. The content of saliva in PBS is different from that in PBS, and the concentration of saliva is different from that in PBS. The solution of saliva component is reported in the paper. The pretreatment process is improved. The improvement of the project is necessary. Based on the principle of diversity, the existing concentration method is improved, and the possibility of bioconcentration in the presence of A new type of food in the water environment is tested. Add the test results, less than 10-100 times the concentration of the results, and confirm Kyoto City Food A Purchase Inspection Results 120 New Products The internal positive response to PEDV is added and the problem is identified. Food A is optimized for the development of a new type of food concentrate and extraction method. Food A is optimized for the development of a new type of food concentrate and extraction method.

项目成果

京都大学・東南アジア地域研究研究所

京都大学东南亚研究所