MYC遺伝子関連肝癌における癌免疫微小環境の解析と革新的治療の開発

本研究課題の目的は、MYC遺伝子関連肝癌の癌免疫微小環境を明らかにすることであり、さらには肝細胞癌に対する新たな革新的治療戦略を確立することである。本年は、まずプレリミナリー実験の検証として、マウスの肝細胞癌株Xに対して、Trp53ノックアウトをした細胞株XPと、さらにMYCを過剰発現させた細胞株XPMを作製した。それぞれの蛋白発現をウェスタンブロットで評価し、Trp53ノックアウト、MYC過剰発現を確認した。以上の実験により、本研究を遂行する上で必要な細胞株の作成が完了した。次に細胞株XPMをヌードマウスに皮下移植し、造腫瘍性を有することを確認した。形成された腫瘍を初代培養することで、XPMのいくつかのクローン株を作製した。以上の操作により、今後の実験において複数のクローン株での評価、比較を行うことが可能となった。上記細胞株の形態および機能評価のためin vitroの実験を施行した。まず電子顕微鏡による形態学的評価では、XPに比べXPMでは核小体の顕在化を認めており、細胞周期の異常が示唆された。そこでフローサイトメトリーにより細胞周期を評価したところ、XPMではXPに比べ、S期およびG2/M期の細胞割合が大きく、やはり細胞周期異常を示唆する結果であった。以上の結果から、作成した細胞株XPMは細胞周期異常を伴う細胞株であり、高悪性度肝細胞癌を示唆することが示された。XPMを同系統のC57BL/6マウスに皮下移植したところ高度な増腫瘍性を有する腫瘍が形成された。上記結果はin vitroの実験で示唆された細胞周期異常に矛盾しない所見である。今後は同系統移植腫瘍の病理学的解析および同腫瘍での複合免疫療法の奏効やその機序について評価をおこなう方針である。

本研究課題の目的は、MYC遺伝子関連肝癌の癌免疫微小環境を明らかにすることであり、さらには肝細胞癌に対する新たな革新的治療戦略を確立することである。本年は、まずプレリミナリー実験の検証として、マウスの肝細胞癌株Xに対して、Trp53ノックアウトをした細胞株XPと、さらにMYCを過剰発現させた細胞株XPMを作製した。それぞれの蛋白発現をウェスタンブロットで評価し、Trp53ノックアウト、MYC過剰発現を確認した。以上の実験により、本研究を遂行する上で必要な細胞株の作成が完了した。次に細胞株XPMをヌードマウスに皮下移植し、造腫瘍性を有することを確認した。形成された腫瘍を初代培養することで、XPMのいくつかのクローン株を作製した。以上の操作により、今後の実験において複数のクローン株での評価、比較を行うことが可能となった。上記細胞株の形態および機能評価のためin vitroの実験を施行した。まず電子顕微鏡による形態学的評価では、XPに比べXPMでは核小体の顕在化を認めており、細胞周期の異常が示唆された。そこでフローサイトメトリーにより細胞周期を評価したところ、XPMではXPに比べ、S期およびG2/M期の細胞割合が大きく、やはり細胞周期異常を示唆する結果であった。以上の結果から、作成した細胞株XPMは細胞周期異常を伴う細胞株であり、高悪性度肝細胞癌を示唆することが示された。XPMを同系統のC57BL/6マウスに皮下移植したところ高度な増腫瘍性を有する腫瘍が形成された。上記結果はin vitroの実験で示唆された細胞周期異常に矛盾しない所見である。今後は同系統移植腫瘍の病理学的解析および同腫瘍での複合免疫療法の奏効やその機序について評価をおこなう方針である。