近赤外線自家蛍光粒子に着目した動脈硬化プラークの質的診断法および治療法の開発

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2022年度は、自家蛍光発生細胞（THP-1マクロファージ様細胞に酸化LDLを添加し5日間培養）を用いて自家蛍光発生のメカニズム解明を目的としたIn vitroの実験に取り組んだ。自家蛍光発生には、リソソーム機能不全、オートファジー不全を背景としているという仮説に基づき、qPCR、ウェスタンブロットでリソソーム・オートファジー関連因子の発現を解析した。自家蛍光発生マクロファージでは、酸化LDLを添加して４８時間培養した通常の泡沫化マクロファージ（自家蛍光発生なし）と比べ、LAMP1、LAMP2、Atg7のmRNA発現は低下していた。また、LAMP1、LAMP2、LC3を標的としたウェスタンブロットでも、これら蛋白の発現は低下する傾向が見られた。酸化LDLを添加すると、脂質分解のため、リソソーム・オートファジー機能は亢進するが、次第に機能低下を来し自家蛍光発生のフェーズでは関連蛋白の発現は低下していると考えられた。現在、リソソーム機能阻害、賦活化薬を用いた自家蛍光発生の変化とリソソーム機能の解析を行っている。また、自家蛍光発生マクロファージでは、炎症関連蛋白（TNFa, CCL20）のmRNAの発現が48時間培養の泡沫化マクロファージと比べ低下していた。サイトカイン合成能は低下し、より細胞死に近づいている状態を反映していると考えられた。プラーク内環境における自家蛍光発生マクロファージの意義について、さらに検証を進めていく。