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上皮管腔形成におけるWnt5aによる極性制御の分子機構

Wnt5a在上皮管形成中极性控制的分子机制

基本信息

批准号：
23890094
负责人：
麓勝己
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-08-24 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23890094/
关键词：
Wnt5a 上皮管腔極性 Wnt3a β-カテニン経路

项目摘要

本研究では、マウス胎児より摘出した臓器の上皮管腔組織をモデルとし、管腔形成におけるWntシグナルによる極性制御の分子機構とその意義を明らかにすることを目的とする。今年度は、上皮管腔形成を解析するための実験系の確立、極性因子群の局在変化、Wntリガンドによる上皮管腔に対する影響を解析した。実験系として、胎生11日目マウス胚より摘出した肺を用いて1) 器官培養(細かな穴(直径0.4μm)の開いたフィルターをメディウム上に浮かせ、その上に臓器を静置し培養する)、2) 上皮単独培養(間質を取除いた上皮組織をマトリゲル内に埋め込み培養する)、の二つの培養系を確立した。これにより注目している極性因子群の局在変化解析や過剰発現系及び発現抑制系を用いた機能解析を行うことが可能となる。次に頂底極性に関与する極性因子群の局在変化を解析するため、免疫染色を行ったところ、頂端マーカーであるEzrinが管腔の陥入部において消失している。このことから上皮管腔が分岐する際には脱極性が必要であることが考えられた。さらに興味深いことに、Wnt5aリガンドを上皮単独培養系に処理すると分岐が抑制され、頂端マーカーの強い染色が見られたことから、極性化に対して促進的に働くことが考えられた。一方、Wnt-β-カテニン経路の代表的リガンドであるWnt3a処理によって、上皮管腔の分岐が誘導されることも見いだした。Wnt5aはWnt3aによる遺伝子発現調節経路(Wnt-β-カテニン経路)を抑制することが知られており、Wnt5aは生理的に発現している他のWntリガンドに対して抑制的に働いている可能性も考えられる。以上より、Wnt5aによる極性制御だけでなく、Wnt5aと他のWntリガンドとの協調的な働きが管腔形成に重要であると考えられた。

The purpose of this study is to clarify the molecular mechanism of polar regulation in the development of epithelial lumen tissue and lumen formation. This year, the analysis of epithelial lumen formation, the establishment of the polar factor group, Wnt change, the analysis of epithelial lumen effects 1) Organ culture (fine hole (diameter 0.4μ m), open hole (diameter 0.4μm), floating hole (diameter 0.4μm), static culture (diameter 0.4μm), 2) Epithelia culture (stroma removed, epithelial tissue culture), 2) Establishment of culture system. The polarity factor group is analyzed in the process of transformation, the occurrence system and the occurrence inhibition system are analyzed in the process of function transformation. The polarity factor group of the sub-bottom polarity is analyzed in the middle of the lumen, and the immunostaining is performed in the middle of the lumen. When the epithelial lumen diverges, it is necessary to depolarize it. In addition, Wnt5a was isolated from the culture medium and treated with different methods. Wnt-β-cnt pathway is a representative of Wnt-3a treatment, and epithelial lumen differentiation is induced. Wnt5a is inhibited by the Wnt-β-channel, and Wnt5a is inhibited by the Wnt-β-channel. Wnt 5a and Wnt 5b are important for the formation of the lumen.