新規抗体作製法を用いた抗血小板活性化因子受容体抗体の樹立

利用新的抗体生产方法建立抗血小板激活因子受体抗体

• 批准号: 23890173
• 负责人: 平川 城太朗
• 金额: $ 1.08万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23890173/
• 关键词: モニクローナル抗体; ノックアウトマウス; 血小板活性化因子受容体; GPCR

本研究計画は新規に提案する手法に従い、血小板活性化因子受容体(PAFR)に対する新規抗PAFRモノクローナル抗体を作製することを目的とする。PAFRはGタンパク質共役型受容体であり、これまでにウエスタンブロッティング法やフローサイトメトリー法などに使用可能なモノクローナル抗体は作製されていないのが現状である。そのため、PAFRを過剰に発現する細胞株でPAFR欠損マウスを免疫するという手法を用い、効率よく抗PAFRモノクローナル抗体の作製を目指した。まず始めに、マウスPAFR遺伝子ををpcDNA3、1に挿入後、シークエンスを確認しコンストラクトを作製した。免疫元となるPAFR過剰発現株の作製はチャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO-K1)、マウス胸腺腫(BW5147)にピペット型遺伝子導入装置を用いて遺伝子導入し、セレクション・クローニング後、リアルタイムPCR法により高いPAFR発現を持つクローンを確認し、PAFR過刺発現株を樹立した。続いてPAFR発現CHO-K1をアジュバントAlumと混合させ、2週間から1ヶ月おきに腹腔内投与を4回行った。細胞株免疫後にマウス血清を回収し、PAFR発現BW5147への血清反応性(抗体価)をフローサイトメトリー法にて解析すると僅かではあるが、免疫3回後から抗体価の上昇が確認された。以上の結果、新規に提案する手法を用いることにより、PAFRに対する免疫誘導がマウス生体内で起こることが確認された。複数のPAFR過剰発現株を用いることにより、マウスへの免疫、抗体スクリーニングまで、抗体捌立に有用な細胞株が樹立できたことが明らかとなった。

In this study, we plan to introduce new regulations, such as manipulation, platelet activating factor receptor (PAFR), anti-PAFR antibody, anti-platelet activating factor, platelet activating factor, platelet activating factor and platelet activating factor. PAFR

项目成果

Novel Anti-carbohydrate Antibodies Reveal the Cooperative Function of Sulfated N- and O-Glycans in Lymphocyte Homing

• DOI: 10.1074/jbc.m110.167296
• 发表时间: 2010-12-24
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Hirakawa, Jotaro;Tsuboi, Koichiro;Kawashima, Hiroto
• 通讯作者: Kawashima, Hiroto