高内皮細静脈特異的ヘパラン硫酸欠損マウスを用いたリンパ球ホーミングに関する研究

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本研究では、リンパ球ホーミングにおけるヘパラン硫酸の機能について解析することを目的とする。リンパ球ホーミングとは、リンパ球が血管系と二次リンパ組織間を絶えず循環して異物の侵入を監視し、免疫応答を調節するものである。これまでに、リンパ球ホーミングにはリンパ球は二次リンパ組織内の高内皮細静脈上と呼ばれる特殊な血管に接着することが知られている。さらに高内皮細静脈はリンパ球がリンパ組織へと遊走する際に入り口として機能する特殊な血管である。また、リンパ球ホーミングには高内皮細静脈上のヘパラン硫酸に結合する遊走化因子ケモカインが重要な役割を果たしていると考えられているが、in vivoにおけるその機能については報告されていない。ヘパラン硫酸は生体内で多様な機能を担っているため、全身性に遺伝子欠損されると胎生致死になることが知られる。そこで本研究では、高内皮細静脈特異的にヘパラン硫酸を欠損するコンディショナルノックアウトマウスを作製しリンパ球ホーミングにおけるヘパラン硫酸の機能について解析を行った。まず始めに高内皮細静脈特異的に組替え酵素Creリコンビナーゼ(Kawashima et al.J. Immunol.182:5461)を発現するトランスジェニックマウスとヘパラン硫酸生合成酵素EXT-1 Flox/Floxマウスと掛合わせ、高内皮細静脈特異的にヘパラン硫酸を欠損するマウスを作製した。作製したマウス及び同腹仔から二次リンパ組織を摘出し、高内皮細静脈特異的な抗体MECA-79及び、抗ヘパラン硫酸抗体10E4を用いて免疫組織染色を行ったところ、高内皮細静脈特異的なヘパラン硫酸の欠損が確認された。リンパ組織の大きさやB細胞及びT細胞局在や、リンパ組織の形態に違いは見られないことを確認した。