新規スクリーニング系を用いた、細胞脱落現象の分子機構の解明
使用新的筛选系统阐明细胞脱落的分子机制
基本信息
- 批准号:25893101
- 负责人:
- 金额:$ 1.75万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
- 财政年份:2013
- 资助国家:日本
- 起止时间:2013-08-30 至 2015-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
上皮細胞は上皮組織から脱落してその一生を終る。従来、この脱落は細胞の死後におこると考えられていたが、細胞が生きたまま組織から脱落し、その結果として細胞死が誘導される脱落様式が報告されるなど、 脱落は単なる細胞死の結果ではなく組織恒常性を保つための重要な能動現象であると認識されつつある。しかし脱落現象の分子機構の多くは不明のままで、生理的意義も実証されていない。そこで本研究は、脱落の誘導や実行に関与する遺伝子を同定することにより、脱落現象の分子機構の解明を目指す。具体的には、申請者が最近ショウジョウバエにおいて樹立したスクリーニング系を用い、腸上皮における細胞脱落に関与する遺伝子を同定することを目的とする。この方法では、同時に同位置で生まれた双子細胞由来の双子子孫細胞集団 (双子クローン)を別々の蛍光で標識すると共に、一方のクローンでのみ遺伝子ノックダウンを誘導する。このシステムを、脱落が恒常的におこるショウジョウバエ腸上皮で用い、各遺伝子のRNAiトランスジェニック系統について双子クローンを誘導後、分裂を停止させ、RNAi発現クローンの総細胞数が脱落不全のため過剰となる表現型を指標にスクリーニングを行うことを計画する。本年度は、このスクリーニングの実施に先立って必須となるいくつかの準備実験を行った。まず、この系においてRNAiを腸上皮で誘導するための適切なプロモーターの検討を行った結果、アクチンプロモーターを用いることを決定した。さらに、クローン誘導のタイミングや、表現型をフローサイトメトリーを用いて検出するために必要となる、腸管からの単一細胞調製操作の実験条件の最適化を終えた。これにより、今後は、脱落実行装置の構成分子ミオシンなどのRNAiをこの系を用いて誘導し、脱落異常の表現型が効率よく検出出来るか最終検証を行い、続いて実際のスクリーニングへと研究を進める予定である。
Epithelial cells shed epithelial tissue and died. In the case of cell death, the shedding pattern is reported in the case of cell death. The shedding pattern is reported in the case of cell death. The shedding pattern is reported in the case of cell death. The molecular mechanism of shedding phenomenon is unknown, and the physiological significance is proved. This study aims to clarify the molecular mechanism of shedding and its induction. The specific purpose of the application is to identify the most recent cell shedding and cell growth in the intestinal epithelium. The method includes the following steps: generating twin cells at the same time and at the same position, generating twin progeny cell groups (twin cells), and inducing twin progeny cell groups (twin cells) by light identification. The expression pattern, shedding, and constant expression pattern of these genes in the intestinal epithelium, the RNAi expression pattern of each gene, and the expression pattern index of RNAi expression pattern in the gut epithelium, and the expression pattern index of RNAi expression pattern in the gut epithelium, and the RNAi expression pattern of each gene. This year, we must conduct the preparation work in advance. The results of the study on the role of RNAi in intestinal epithelium were determined. To optimize the necessary conditions for the regulation of cell culture and phenotype in vitro. In the future, the RNAi system of the component molecules of the shedding device will be used to induce and detect the phenotype of shedding abnormality. The final identification will be carried out and the research on shedding will be carried out in advance.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Innate Immunity and Inflammation
- DOI:10.1016/b978-0-12-801238-3.64228-9
- 发表时间:2018
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:S. McKarns
- 通讯作者:S. McKarns
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- 影响因子:0
- 作者:
川根 公樹;長田 重一;北村勝朗;T.Yamaguchi;広瀬 進;長田 重一;生田久美子;Katsuhisa Ozaki - 通讯作者:
Katsuhisa Ozaki
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