E3ユビキチンリガーゼCUL3による血管新生制御機構の解析

E3泛素连接酶CUL3调控血管生成机制分析

• 批准号: 25893160
• 负责人: 坂上 倫久
• 金额: $ 2.16万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-08-30 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25893160/
• 关键词: CUL3; VEGFR2; BTB; angiogenesis

最近我々は、E3ユビキチンリガーゼの一つであるCUL3が血管新生に極めて重要であることを発見した。その中でCUL3は、VEGFR2 mRNAの安定制御を通じて血管内皮細胞機能に関与することを新たに見出した。本研究は、CUL3によるVEGFR2 mRNA制御機構に焦点を当て、血管内皮細胞においてCUL3が標的とする基質およびそのアダプタータンパク質を同定し、血管新生におけるCUL3複合体の果たす生理的役割を明らかにすることを目指すものである。はじめに、VEGFR2-3' untranslated region（UTR）をベイトとしたプルダウン法によって、VEGFR2 mRNA安定性を制御する因子の同定を行う計画を進めたが、ベイト調整が非常に困難で時間を要したため、アダプタータンパク質を同定する実験を優先的に進めるここととした。CUL3のアダプタータンパク質はBTBドメイン（BTBD）を持つことが知られ、ヒトでは180種程度存在することが知られている。この中で血管内皮細胞特異的に高発現するいくつかのBTBDタンパク質に対するsiRNAを合成し、VEGFR2 mRNAを制御するBTBDタンパク質のスクリーニングを行った。その結果、二つの因子（VEGFR2 regulating protein1 and 2）を同定することに成功した。これらのタンパク質を血管内皮細胞においてノックダウンすると、VEGFR2の発現が著しく低下することが分かった。これはCUL3ノックダウン時と同程度であった。一方で、本タンパク質を血管内皮細胞に過剰発現させると、VEGFR2の発現量が大幅に増強されることも分かった。また、293T細胞を用いたプルダウン実験より、同定した二つのBTBDタンパク質はCUL3と結合することを確認した。

Recently, I have seen the development of angiogenesis in CUL3. The regulation of CUL-3 and VEGFR-2 mRNA in vascular endothelial cell function has been reported. This study focuses on the regulation of VEGFR2 mRNA in CUL3, vascular endothelial cells, matrix and quality of CUL3, angiogenesis, and the effects of physiological regulation of CUL3 complex. VEGFR2 -3' untranslated region (UTR) is a very difficult time to adjust the stability of VEGFR2 mRNA. CUL3 has 180 different levels of knowledge, including BTBD. These vascular endothelial cell-specific high levels of expression are detected by siRNA synthesis and VEGFR2 mRNA regulation. The results were consistent with VEGFR2 regulating proteins 1 and 2. The expression of VEGFR-2 in vascular endothelial cells was significantly lower than that in control group.これはCUL3ノックダウン时と同程度であった。The expression of VEGFR2 in vascular endothelial cells was significantly increased. 293T cells are used to identify and identify the nature of the CUL3 binding.

项目成果

生化学・分子遺伝学

生物化学/分子遗传学

Versatility of E3 ubiquitin ligase Cullin3 as an angiogenic balance regulator

E3 泛素连接酶 Cullin3 作为血管生成平衡调节剂的多功能性

• 发表时间: 2014
• 作者: Kenichiro Harada;Koji Matsuo;Hirotaka Yamagata;Mami Nakashima;Masayuki Nakano;Naoko Higuchi;Fumihiro Higuchi;Teruyuki Hobara;Koji Otsuki;Tomohiko Shibata;Toshio Watanuki;Katsuhiko Ueda;Matakazu Furukawa;Masaki Fukunaga;Yusuke Fujita;Keigo S;Tomohisa Sakaue
• 通讯作者: Tomohisa Sakaue