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新規がん治療標的経路として見出されたhypusine axisの分子機構の解明

阐明垂体轴的分子机制，发现其作为癌症治疗的新靶点途径

基本信息

批准号：
26890012
负责人：
村松智輝
金额：
$ 0.92万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-08-29 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26890012/
关键词：
Hypusine経路がん転移翻訳制御口腔扁平上皮がん

项目摘要

Hypusine経路は、タンパク質の翻訳制御を担っており、発生や細胞増殖などその機能は多岐にわたる。現在までに申請者は、同経路の異常な活性化がRhoAの翻訳を促進し、この被翻訳遺伝子が、がん細胞の移動能・浸潤能を亢進することを見出しているが、その他のがんの悪性化に関与する被翻訳遺伝子は未だ不明である。本研究の目的は、RNAシーケンス解析とプロテオーム解析で得られたデータを用いた統合的オミックス解析により、同経路の異常な活性化による腫瘍形成の亢進と関連する被翻訳遺伝子を同定し、新規がん治療標的経路としてのhypusine axisの意義を明らかにすることである。今年度は、現在までに明らかとなってきたhypusine経路が関わるがん転移機構の解析を行い、それら解析結果をまとめた後、論文投稿に至っている (査読中)。また、hypusine経路の標的遺伝子探索として、翻訳を担うeIF5Aと結合するmRNAの同定を行うべく、RNA-ChIP assay (RIP-assay)を施行した。また、RIP-assayで得られたRNAを用いてRNA-seqを行うに当たり、RNAの断片化処理の条件検討 (ソニケーターの出力、処理回数、一回あたりの秒数)を行った。条件を決定した後、RNA-seq用に最適化されたRNAを用いて、ライブラリー作製を施行した。ライブラリーの品質を検討するため、バイオアナライザーで解析した際にRNA-seqに十分な量のライブラリーが作製されていなかったため、内在性のeIF5Aに結合するRNAの収集率が低いことが判明した。そのため、現在、eIF5Aの強制発現系を構築し、RIP-assayにはeIF5Aに対する抗体ではなくTag抗体を用いた形でeIF5Aに結合するRNAを回収している。また、プロテオーム解析においても上記強制発現系において解析を施行中である。

Hypusine pathway, quality control, cell proliferation, and multiple functions At present, the applicant is not aware of the abnormal activation of RhoA in the same pathway, the increase of cell mobility and infiltration energy, and the unclear relationship between the abnormal activation of RhoA and the change of RhoA gene. The purpose of this study is to identify and clarify the significance of RNA pathway analysis and hypusine axis in the treatment of tumor formation and abnormal activation of the same pathway. This year, the current situation is clear, the hypusine circuit is related, the analysis of the shift mechanism is carried out, the analysis results are analyzed, and the paper is submitted to the middle (in the middle). The target gene of the hypusine pathway is explored, inverted, and eIF5A is combined with mRNA synchronization. RNA-ChIP assay (RIP-assay) is performed. The RIP-assay is used to detect RNA fragments. The RNA-seq is used to detect RNA fragments. The conditions for RNA fragmentation are discussed. After the conditions were determined, RNA-seq was used to optimize the use of RNA, and real-time processing was implemented. The RNA aggregation rate of the RNA bound to the eIF5A is low when the RNA-seq is analyzed. EIF-5A stress detection system construction, RIP-assay, EIF-5A antibody, EIF-5A binding RNA In the process of analysis, the system of stress occurrence is recorded.