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Importinαの新規分子認識機構の解明

阐明Importinα的新型分子识别机制

基本信息

批准号：
26891032
负责人：
宮本洋一
金额：
$ 0.92万
依托单位：
独立行政法人医薬基盤研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-08-29 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26891032/
关键词：
核-細胞質間輸送 Importin alpha 核移行シグナル

项目摘要

核移行シグナル受容体分子importin αのC末端約120アミノ酸（C末端酸性領域：アルマジロリピート9-10と酸性アミノ酸クラスター）は、異なる種間でよく保存された特徴的な領域である。本研究は、このC末端酸性領域が持つ潜在的な基質認識活性に着目し、importin αの新たな分子認識の側面を明らかにすることを目的とするものである。先行研究において、我々はGST融合型importin α2(マウス、KPNA2)に相互作用する分子をラットの精巣より探索し、そのうちC末端酸性領域結合配列(importin α C-terminal binding segment: iCBS)を持つものとしてSMARCA4/BRG1を同定していた(Arjomand et al.,FASEB J., 2014)。今回、FLAGタグを融合したimportin α2のヒトホモログimportin α1(KPNA2)ならびにヒトimportin α8(KPNA7)それぞれの安定発現HEK293細胞株を用いたプロテオミクス解析を行い、計250の結合候補分子を同定し、その中にSMARCA4/BRG1が存在することを見出した。さらに、importin α1結合候補分子中に別のサブタイプであるimportin α6が、importin α8結合候補分子にimportin α3が存在しており、importin αがヘテロダイマーを形成する可能性を示唆した。また、本研究では光架橋性側鎖を持つ非天然アミノ酸、パラベンゾイルフェニルアラニン(BPA)を用いた部位特異的光架橋法を用いて、Nup153やSMARCA4/BRG1のiCBS認識に重要なアミノ酸を同定することを目的の１つとしている。すでに、この実験に用いるマウスimportin α2変異体を４種類作製することに成功している。

The C-terminal of the receptor molecule importin α is about 120 ° C (C-terminal acidic domain: 9-10 ° C). In this study, the C-terminal acid domain was identified as a potential substrate for recognition of the activity of importin α. In our previous research, we explored the molecular interaction between GST fusion importin α2(KPNA2) and SMARCA4/BRG1 (Arjomand et al., FASEB J., 2014)。In this study, FLAG fusion with importin α2 and importin α8(KPNA 2) was successfully performed in HEK293 cell line. The results showed that SMARCA4/BRG1 existed in HEK293 cell line. In addition, importin α1 binds to candidate molecules and importin α6 binds to candidate molecules and importin α8 binds to candidate molecules and importin α3 binds to candidate molecules. In this study, we investigated the use of site-specific photobridging methods for the identification of non-natural acids, photobridging side-locks (BPA), and Nup153 and SMARCA4/BRG1 iCBS. 4 kinds of products are successfully manufactured.