iPS細胞を用いた腱・靭帯細胞への分化誘導系の確立

使用iPS细胞建立肌腱/韧带细胞分化诱导系统

• 批准号: 26893164
• 负责人: 吉本 由紀
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-08-29 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26893164/
• 关键词: Scleraxis; iPS細胞; 腱; 靭帯; Tnmd

初期化遺伝子を体細胞に発現させるためにウイルスベクターを導入すると、作成したiPS細胞のゲノムに変異が生じることが問題になっている。そこで、初期化遺伝子を発現させるベクターとして、導入細胞のゲノムに挿入されないエピソーマルベクターを選択した。エピソーマルベクターによるマウスiPS細胞株の樹立はこれまでに報告がないため、効率良く樹立するための条件検討を行った。異なった発生段階にあるマウス胎仔 (胎生12日～14日齢)から細胞分離を行って比較検討し、胎生14.5日胚から生存率が高く増殖性を維持したMEFを分離する最適条件を確定した。次に、ScxGFPマウスの由来のMEFにOCT3/4, SOX2, KLF-4, c-MYC, LIN28, NANOG, EBNA1の遺伝子とp53に対するshRNAが挿入された4種類のエピソーマルベクターをエレクトロポレーションにより導入した。継代を行わず、15%の血清添加ES細胞用培地中で4週間培養を行った結果、iPS細胞様の形態を示すコロニーが複数得られた。また、TnmdCreノックインマウスとレポーターマウスを用いたレポーター発現解析の結果、Tnmdの発現領域でTomatoを検出するには、ゲノムに挿入されるトランスジーンが１コピーでは不十分であることが判明した。従って、TnmdTomatoマウスの作成には、Bacterial artificial chromosome (BAC)でなくTnmdの発現制御領域を含むトランスジーンを構築する必要がある。現在、Tnmdの遺伝子発現パターンを反映するTnmdゲノム領域の範囲の検討を行っている。2015年度の4月より、若手研究(B)に本研究の内容を含む課題、「ゲノム編集技術を用いた歯根及び頭蓋の疾患モデルの作成と解析」が採択され、引き続き研究を継続している。

问题在于，当引入病毒载体以表达在体细胞中的重编程基因时，突变发生在创建的IPS细胞的基因组中。因此，未插入引入细胞基因组中的偶发矢量被选为表达可再生基因的载体。由于没有使用各个媒介建立小鼠IPS细胞系的报道，因此研究了条件以有效地建立它们。在不同的发育阶段（胚胎生命的12至14天）将细胞与小鼠胎儿分离，并比较它们，并确定隔离生存率高的MEF的最佳条件，并从胚胎寿命胚胎寿命胚胎寿命胚胎胚胎寿命中维持增生性。接下来，通过电穿孔引入了四个偶发向量，其中将Oct3/4，Sox2，Klf-4，C-Myc，Lin28，Nanog和EBNA1和EBNA1和SHRNA的基因插入从SCXGFP小鼠中插入的MEF中。在没有通过的情况下，在15％的血清添加ES细胞培养基中进行了4周的培养，结果，获得了一些表现出IPS细胞样形态的菌落。此外，使用TNMDCRE敲门小鼠和报告的小鼠的记者表达分析表明，插入基因组的转基因的一个副本不足以检测到TNMD表达区域中的番茄。因此，创建TNMDTOMATO小鼠需要构建包含TNMD表达控制区域的转基因，而不是细菌人造染色体（BAC）。目前，我们正在研究反映TNMD基因表达模式的TNMD基因组区域的范围。从2015年4月开始，包括这项研究内容的问题在年轻研究（B）中采用了“使用基因组编辑技术对根和颅疾病的疾病模型创建和分析”，研究继续继续进行。

项目成果

Sox9- and Scleraxis-Cre Lingeage Fate Mapping in Aortic and Mitral Valve Structures.

主动脉瓣和二尖瓣结构中的 Sox9- 和 Scleraxis-Cre Lingeage 命运图谱。

• DOI: 10.3390/jcdd1020163
• 发表时间: 2014
• 期刊: J. Cardiovasc. Dev. Dis.
• 作者: Austin B;Yoshimoto Y;Shukunami C;Lincoln J.
• 通讯作者: Lincoln J.

軟骨と腱/靭帯の連結部の構築におけるScx+/Sox9+前駆細胞の役割

Scx+/Sox9+ 祖细胞在构建软骨和肌腱/韧带连接中的作用

• 发表时间: 2014
• 作者: Miki H;Minakuchi H;Ueda M;Shigemoto S;Suzuki Y;Maekawa K;Matsuka Y;Kuboki T.;高畠 清文;吉本由紀
• 通讯作者: 吉本由紀

歯周靭帯形成を解析するためのin vivoモデルの構築

构建分析牙周膜形成的体内模型

• 发表时间: 2014
• 作者: Takimoto A.;Kawatsu M.;Yoshimoto Y.;Kawamoto T.;Seiryu M.;Takano-Yamamoto T.;Hiraki Y.;Shukunami C.;宿南 知佐;吉本由紀，宿南知佐
• 通讯作者: 吉本由紀，宿南知佐