iPS細胞を用いた腱・靭帯細胞への分化誘導系の確立

使用iPS细胞建立肌腱/韧带细胞分化诱导系统

• 批准号: 26893164
• 负责人: 吉本 由紀
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-08-29 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26893164/
• 关键词: Scleraxis; iPS細胞; 腱; 靭帯; Tnmd

初期化遺伝子を体細胞に発現させるためにウイルスベクターを導入すると、作成したiPS細胞のゲノムに変異が生じることが問題になっている。そこで、初期化遺伝子を発現させるベクターとして、導入細胞のゲノムに挿入されないエピソーマルベクターを選択した。エピソーマルベクターによるマウスiPS細胞株の樹立はこれまでに報告がないため、効率良く樹立するための条件検討を行った。異なった発生段階にあるマウス胎仔 (胎生12日～14日齢)から細胞分離を行って比較検討し、胎生14.5日胚から生存率が高く増殖性を維持したMEFを分離する最適条件を確定した。次に、ScxGFPマウスの由来のMEFにOCT3/4, SOX2, KLF-4, c-MYC, LIN28, NANOG, EBNA1の遺伝子とp53に対するshRNAが挿入された4種類のエピソーマルベクターをエレクトロポレーションにより導入した。継代を行わず、15%の血清添加ES細胞用培地中で4週間培養を行った結果、iPS細胞様の形態を示すコロニーが複数得られた。また、TnmdCreノックインマウスとレポーターマウスを用いたレポーター発現解析の結果、Tnmdの発現領域でTomatoを検出するには、ゲノムに挿入されるトランスジーンが１コピーでは不十分であることが判明した。従って、TnmdTomatoマウスの作成には、Bacterial artificial chromosome (BAC)でなくTnmdの発現制御領域を含むトランスジーンを構築する必要がある。現在、Tnmdの遺伝子発現パターンを反映するTnmdゲノム領域の範囲の検討を行っている。2015年度の4月より、若手研究(B)に本研究の内容を含む課題、「ゲノム編集技術を用いた歯根及び頭蓋の疾患モデルの作成と解析」が採択され、引き続き研究を継続している。

The initial generation of DNA in somatic cells is a problem that can be solved by introducing DNA into iPS cells. In addition, the initial stage of gene expression, the introduction of cells, the selection of genes, and the selection of genes. The conditions for the establishment of iPS cell lines are discussed. The optimum conditions for cell separation of embryos at 12 ~14 days of gestation were determined. Next, ScxGFP was introduced into MEF for OCT3/4, SOX2, KLF-4, c-MYC, LIN28, NANOG, EBNA1 and p53. After 4 weeks of culture with ES cells and 15% serum addition, the morphology of iPS cells was analyzed. In addition, the results of the analysis of the TnmdCre kee Inmakusand TnmdCre kee usare used to detect Tomato in the field of Tnmd development, but it is clear that the number of lanes needed to be inserted into the computer is only 1 computer. It is necessary to construct a Bacterial artificial chromosome (BAC) for the development of Tnmd and its control domain. Now, Tnmd's development process is under way. Tnmd's development process is under way. In April 2015, if the content of this study is included in the research (B), the topic of "the formation and analysis of tooth root and head diseases in the use of editing technology" is selected and introduced into the research.

项目成果

Sox9- and Scleraxis-Cre Lingeage Fate Mapping in Aortic and Mitral Valve Structures.

主动脉瓣和二尖瓣结构中的 Sox9- 和 Scleraxis-Cre Lingeage 命运图谱。

• DOI: 10.3390/jcdd1020163
• 发表时间: 2014
• 期刊: J. Cardiovasc. Dev. Dis.
• 作者: Austin B;Yoshimoto Y;Shukunami C;Lincoln J.
• 通讯作者: Lincoln J.

軟骨と腱/靭帯の連結部の構築におけるScx+/Sox9+前駆細胞の役割

Scx+/Sox9+ 祖细胞在构建软骨和肌腱/韧带连接中的作用

• 发表时间: 2014
• 作者: Miki H;Minakuchi H;Ueda M;Shigemoto S;Suzuki Y;Maekawa K;Matsuka Y;Kuboki T.;高畠 清文;吉本由紀
• 通讯作者: 吉本由紀

歯周靭帯形成を解析するためのin vivoモデルの構築

构建分析牙周膜形成的体内模型

• 发表时间: 2014
• 作者: Takimoto A.;Kawatsu M.;Yoshimoto Y.;Kawamoto T.;Seiryu M.;Takano-Yamamoto T.;Hiraki Y.;Shukunami C.;宿南 知佐;吉本由紀，宿南知佐
• 通讯作者: 吉本由紀，宿南知佐