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光学顕微鏡を用いたレトロウイルス可視化技術の樹立

光学显微镜逆转录病毒可视化技术的建立

基本信息

批准号：
26893176
负责人：
泉泰輔
金额：
$ 0.92万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-08-29 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26893176/
关键词：
HIV-1 光学顕微鏡 FRET

项目摘要

HIV-1 Gag はウイルスの核であるコアを形成するタンパク質であり、感染細胞から出芽後、Protease により6つの機能的なタンパク質に切断され、感染性を持った成熟ウイルス粒子が形成される。申請者は未成熟および成熟ウイルス粒子を蛍光の違いから区別できるウイルス可視化技術の樹立を目指し、本研究を始めた。Gag の MA-CA 間にFRET に適した蛍光タンパク質の組み合わせである CFP と YFP を HIV-1 Protease cleavage site と共に組み込んだ。ウイルスは出芽後 Protease により、Gag を切断する際に、CFP, YFP も Gag から切り離され、コアの内側に局在する。Protease 欠損株 (deltaPro)では FRET シグナルが高感度で検出された (YFP/CFP=1.22) が、野生型ウイルスの FRET シグナルは deltaPro に比べて有為に低い値を示した (YFP/CFP=0.54)。また、野生型ウイルスでは出芽したウイルス粒子全体の 4.5% が未成熟ウイルスである事がわかった。コアは一般的に密封されているが、一部のコアは閉じきっていない事が報告されている。Gag から切り離された蛍光タンパク質はコアの内側に局在するが、コアが閉じきっていないと外に漏れ出す。ウイルス粒子を界面活性剤で処理しても deltaPro ウイルス粒子のほぼ全てでシグナルは維持された (0.3% 消失)が、一方で野生型ウイルスでは 50.6% の粒子がそのシグナルを消失し、結果半数近いウイルス粒子はコアが密封されていない事が示唆された。本研究により、成熟ウイルスの可視化及びコアの開閉率を検出するシステムの構築成功した。今後は本可視化技術を用いてコアの開閉率と感染性の間に相関性があるのかを調べる。

HIV-1 Gag has the ability to form a protein, to bud, to protect, to cut off, to mature, and to form infectious particles. The applicant is immature and mature, and the research is the beginning of the establishment of visualization technology. GAG's MA-CA interface allows you to access all components of the HIV-1 protein cleavage site. After germination, when the gap is cut off, CFP, YFP and Gag are cut off, and the gap is cut off. Protease deficient strain (deltaPro) has a high sensitivity to FRET (YFP/CFP=1.22), wild-type strain has a low sensitivity to FRET (YFP/CFP=0.54). 4.5% of the wild-type particles are immature. The general seal is not included in the report, and the general seal is not included in the report. Gag cut off the light, the quality of the inside of the box, the inside of the box, the outside of the box In addition, 50.6% of the particles in the wild-type group disappeared, and nearly half of the particles in the group disappeared. This study aims to establish a successful system for the visualization and detection of open/close ratio of mature cells. In the future, this visualization technology will be used to adjust the correlation between the open and close rates and infectivity.