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細胞再現系での蛋白質の構造・ダイナミクスの解明

阐明细胞繁殖系统中的蛋白质结构和动力学

基本信息

批准号：
18H03681
负责人：
杉山正明
金额：
$ 29.45万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H03681/
关键词：
細胞模倣系重水素化 HSA 中性子散乱混雑系

项目摘要

細胞再現系の構築のために「１．HSA(Human Serum Albumin)の発現系の確立」「２．75%重水素化蛋白質の発現系の確立」「３．重水素化高分子の合成系の確立」に着手した。１に関しては通常は生体(血清)から抽出しているが、今回は重水素化のために大腸菌発現系の確立を目指している。そのためには、発現ベクターの構築・発現確認・発現条件の最適化が必要となる。今回、研究期間は短かったが発現条件の最適化まで既に進めることができた。困難な点は仮にHSAが発現したとしても、HSAは多くのS-S結合で3次元立体構造を形成しているため、正確に3次元構造を取らせるための発現条件の最適化である。現在、正確な3次元構造を取っているHSAの発現は確認できており、大量発現への条件最適化の段階である。2に関しては７５％の重水素化蛋白質の大量発現を行い、その大腸菌破砕溶液をストックしてある。これから、サイズ選別を行い模倣系構築のためのサイズ別蛋白質ストックの構築方法の検討に入る段階である。また、75%αBクリスタリンの高濃度系＝水晶体模倣系を用いた中性子小角散乱測定は既に行った。現在、データ解析の段階である。3に関しては、重水素化率を指定したポリエチレングリコールの合成に成功しており。高分子クラウダーへの応用に進める段階である。これらはこれ間にない細胞模倣系を構築し中性子散乱技術を用いて任意の蛋白質を希薄系と同様の測定を目指す本計画における根幹をなす技術であり、これらの開発を順当に進める事が出来た。また、これらの技術は他の中性子小角散乱測定においても非常に有用であり、その広範囲での利用が期待される。

The construction of cell reproduction system was discussed in the following topics: 1. Establishment of HSA (Human Serum Albumin) Production System, 2. 75% Hydroproteinized Protein Production System, 3. Establishment of Hydroproteinized Polymer Synthesis System. 1. The development of E. coli in serum was established in the past. It is necessary to optimize the conditions for the development of new technologies. This time, the study period is short and the conditions for discovery are optimized. Difficulties in optimizing the conditions for the formation and correct selection of three-dimensional structures Now, the correct 3D structure is selected, the HSA discovery is confirmed, and the conditions for mass discovery are optimized. 2. The production of 75% heavy proteinized protein in large quantities and the production of Escherichia coli in large quantities are discussed. A study on the construction method of a protein system based on the model system was carried out. High concentration system of αB = crystal imitation system Now, the analysis of the stage. 3. The synthesis of heavy water and heavy water is successful. Polymers are used in different stages. This project aims to develop a new method for the identification and identification of proteins in cell culture. This technique is very useful for the measurement of small angle scattering.